p27kip1和Spy1在肝癌细胞HuH7增殖过程中的表达变化及其相互关系.pdfVIP

628 SUZHOUUNIVERSITYJOURNALOFMEDICALSCIENCE2009；29(4) p27P和Spy1在肝癌细胞 HuH7增殖过程中的 表达变化及其相互关系 柯 靖 ，柯 青 ，陆牡丹 ，王 酉 ，严美娟 。 (南通大学 1．附属医院普外科 ，2．医学院微生物与免疫学教研室，3．医学院神经再生重点实验室，江苏南通 226001) 摘要 ：目的 探讨 p27 和Spyl在肝癌细胞 HuH7增殖过程 中的表达变化及相互关系。方法 采用血清饥饿合 并释放处理肝癌细胞株 HuH7，通过流式细胞术检测该处理对 HuH7细胞生长周期 的影响 ；同时采用 Westernblot、免 疫荧光技术检测不 同生长状态 的HuH7细胞 中p27 和 Spyl的表达及亚细胞定位情况 ；采用免疫沉淀方法检测 HuH7细胞 中p27 与 Spyl的结合情况 。结果 血清饥饿造成 HuH7细胞生长周期停滞 ，Spyl表达下降，p27~p蛋 白 总量增加 ，差异有统计学意义(P0．05或0．01)。与此同时，p27 的阳性信号也 由整个细胞分布转变为胞核高分布 ， 而Spyl的阳性信号则由胞核高分布转变为胞浆高分布。血清释放后刺激细胞进入细胞周期，上述分子呈现相反的变 化，且 p27 的阳性信号在胞浆分布增强。结论 Spy1可能通过与p27 结合来介导 p27 的核 内外分布并影响其 表达 ，从而参与调控肝癌细胞的生长 。 关键词 ：p27 ；Spyl；肝癌；HuH7 中图分类号 ：R735．7 文献标识码 ：A 文章编号 ：l673—0399(2009)04—0628—04 ExpressionandRelationshipofp27kiplandSpylDuringthe ProliferationProcessofHepat0cellularCarcinomaCellHuH7 KEhgKEQin季LUMu—a ，WANGYou2,YANMei-juan (1．DeptofGeneralSurgery，AffiliatedHospitalofNantongUniversity，2．DeptofMicroorganismand Immunology，MedicalCollegeofNantongUniversity，3．TheKeyLaboratory Neuroregeneration，Medical CollegeofNantongUniversity，JiangsuNantong226001，China) Abstract：Objective Toinvestigatetheexpressionandrelationshipofp27 andSpylduring proliferationprocessofHepatocellularcarcinomacellHuH7．M ethods HuH7cellsweretreatedwith serum starvationandrelease，andeffectonthecellgrowthwiththesetreatmentwastestedwithflow cy— tometry ．Theexpressionandlocalizationofp27 and SpylinHuH7 cellin differentgrowth condition weredetectedbyWesternblotand immunofluorescenee．Thecombinationofp27 andSpylwasde— tectedwith immunoprecipitation．Results ThecellcycleofHuH7wasblockedbyserum starvation． TheexpressionofSpylwasdown—regulated．Thealbumenamountofp27 increased．Meanwhile．the locationofp27 wasaccumulatedinnucle