牛膝多肽促大鼠海马神经元突起的生长.pdfVIP

第40卷 第 5期 解 剖 学 报 Vo1．40．No．5 · 696· 2009年 1O月 ACTA ANAT0MICA SINICA 0et．2009 牛膝多肽促大鼠海马神经元突起的生长 袁颖 周松林 顾晓松 丁斐 (1．苏州大学医学部，苏州 215123；2．南通大学江苏省神经再生重点实验室，南通 226001) [摘要] 目的 研究牛膝多肽(ABPP)对体外培养的大 鼠海马神经元突起生长的促进作用及其对生长相关蛋 白一43(GAP一43)和神经丝蛋 白(NF．H)mRNA和蛋 白表达的影响。 方法 以体外原代培养的胎 鼠海马神经元为研 究模型，通过 四甲基偶氮唑盐 (UYr)检测 ABPP对海马神经元细胞活性的影响，通过免疫荧光细胞化学法 ，采用 Image-ProExpress软件测量不 同浓度 ABPP(0．1mg／L、0．5mg／L、1．Omg／L)加药 24h，对海马神经元神经突起生长的影 响；通过实时荧光定量 PCR法定量分析不同浓度 ABPP(0．1mg／L、0．5mg／L、1．0mg／L)加药 6h，对海马神经元 GAP-43 和 NF—H基因表达的影响；采用免疫印迹法观察不同浓度 ABPP(0．1mg／L、0．5mg／L、1．0mg／L)加药24h后 ，对海马神经 元 GAP一43和NF—H蛋白表达的影响。同时应用胞外信号调节激酶(ERK)特异性拮抗剂 PD98059与ABPP共培养海 马神经元 ，分析ABPP对海马神经元 的作用与 ERK通路的关系 。 结果 ABPP可有效地促进海马神经元突起 的生 长 ，加药后24h浓度为 1．0mg／L，作用最强 ；实时荧光定量 RT．PCR、免疫荧光细胞化学法和免疫 印迹检测 的结果表 明，ABPP能增加体外培养 的海马神经元 GAP-43和 NF-H的mRNA和蛋 白表达 ，PD98059可抑制该过程 。 结论 ABPP能促进体外培养的海马神经元神经突起 的生长 ，其作用与上调 GAP-43和 NF-H基 因的表达相关 ，并可能与 ERK通路有关 。 [关键词] 牛膝多肽 ；海马神经元 ；生长相关蛋 白一43；神经丝蛋 白一H；免疫荧光组织化学；实时荧光定量 PCR； 免疫 印迹 ；大 鼠 [中图分类号] Q189 [文献标志码] A [DOI] 10．3969／j．issn．0529—1356．2009．05．002 PolypeptidesofAchyranthesbidentata Blumepromotestheneuritegrowth ofrathippocampalneurons YUAN Ying一，ZHOU Song—lin2 GU Xiao—songz DING Fei2 ， ， (．SchoolofMedicine，SoochowUniversity，Suzhou 215123，China； 2．TheJiangsuKeyLaboratoryofNeuroregeneration，NantongUniversity，Nantong 226001，China) [Abstract] Objective TodeterminetheeffectsofpolypeptidesofAchyranthesbidentataBlume(ABPP)onneufitegrowth in culturedhippocampalneuronsofrats．M ethods Thecellactivityofrathippocampal，neuronswithABPP wastestedwith MTY．Af