抗VWF-A3区特异性单抗SZ-123单链抗体的构建和表达.pdfVIP

874 JOURNALOFSOOCHOW UNIVERSITYMEDICAISCIENCEEDITION2011；31(6) 抗 vWF-A3区特异性单抗 SZ一123单链抗体的构建和表达 王菲菲，赵益明，江 淼，姚拾秀，李雪美，阮长耿 (苏州大学附属第一医院，江苏省血液研究所，卫生部血栓与止血重点实验室， 江苏苏州 215006) 摘要：目的 以能与vWF—A3区特异结合的单克隆抗体 SZ．123为模板，构建其单链抗体 ，为深入研究vwF—A3 结构与功能的关系提供有力的工具。方法 通过逆转录及多聚酶链反应，扩增并克隆单抗 SZ一123的可变区基因 VH、VL，经测序后加入连接肽，构建成 SZ-123单链抗体 (SZ．123ScFV)，并在大肠杆菌中进行表达。采用酶联免 疫吸附试验(ELISA)和Westernblot方法验证 SZ一123ScFV的免疫原性。结果 VH、VL可变区基因符合小鼠抗体 可变区特征 ，SZ．123ScFV基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外，主要以包涵体形式存在，表达量占菌体蛋 白的20％。经过变性和复性后，获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段。结论 成功表达了SZ一123单链抗体， 该小分子抗体具有特异结合vwF-A3区的能力。 关键词 ：vWF—A3区；单链抗体 (ScFv)；原核表达 中图分类号：R331；Q78 文献标识码：A 文章编号：1673—0399(2011J06—0874—05 ConstructionandExpressionofaSingleChain AntibodyofmAb SZ-·123AgainstvW F—A3Domain WANGFei-fei，ZHAO —ming，JIANGMiao，YAOShi—xiu，LIXue-mei，RUANChang—geng (TheFirstHospitalAffiliatedtoSoochowUniversity，JiangsuInstituteofHematology，KeyLaboratoryof ThrombosisandHemostasis，MinistryofHealth，JiangsuSuzhou215006，China) Abstract：Objective ToconstructasinglechainantibodybytakingmAbSZ·123againstvWF—A3 domainasthetemplatetoprovideconvincingevidencesforthefurtherresearchoftherelationbetweenthe configurationandfunctionofVWF—A3domain．M ethods Reversetranscriptionandpolymerizechainre— actionwereusedtoclonetheVregiongenesofmAbSZ一123(VH、VL)．Connectingpeptidewasadded aftertheclonedVH andVLweresequenced，thenthecompoundwereconstructedintoasinglechainan· tibody(SZ-123ScFv)．ThefusionproteinwasexpressedinE．coli．TheimmunogenicityofScFvwasvali- datedbyELISA andW esternblot．Results TheVH andVLgeneswerehomologouswiththepublished genesequencesofmouseantibodyvariableregion．Exceptofralittleproteinofsecretory type，therecom- binantproteinwasmostlyintheofrm ofinclusionbodies，andtheyieldwasupto20％ ofthetotalamount ofbacteriaprotein