抗空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1多克隆抗体的制备与鉴定.pdfVIP

2011年 12月第 37卷第 24 O · 论 著 · 抗空肠弯曲菌外膜蛋 白PEB1多克隆抗体 的制备与鉴定 史 震 任思坡 周爱华 周 峰 汤仁仙 孙万邦 【摘要】 目的 表达空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1，并制备针对该蛋白的多克隆抗体。方法 诱 导培养工程菌EcoliBL21(DE3)表达空肠弯曲菌PEB1重组蛋白。经镍一琼脂糖凝胶亲和层析柱纯 化，透析并定量后，常规免疫新西兰兔。收集血清，盐析法粗提IgG，应用间接 ELISA法和双向琼脂 扩散试验检测抗体效价，并通过Westernblot和玻片凝集试验检测抗体的特异性。结果 得到高纯 度的空肠弯曲菌 PEB1重组蛋 白。用该蛋 白免疫新西兰兔后，获得抗 PEB1多克隆抗体。间接 ELISA法检测抗体效价为l：2×10，双向琼脂扩散试验检测抗体效价为 1：8。结论 运用纯化的 空肠弯曲菌PEB1重组蛋白免疫新西兰兔，获得高效价的多克隆抗体。 【关键词】 空肠弯曲菌；PEB1重组蛋白；多克隆抗体 【中图分类号】 R392 【文献标识码】 A 【文章编号】 0253-3685(2011)24-2891—02 Prelmratlna and identification ofthepolydon~ na tibody againstoutermembraneprotein PEB1in Campylolmcterjejuni SHlZhen。RENSipo，zj Aihua，eta1．DepartmentofMicrobiologyand Immunology，XuzhouMedicalCollege，Xuzhou221002，a [Al~traa] Objective ToexpresstheoutermembraneproteinPEB1ofCampylobacterjejuni andpreparepolyclomlantibodyagainstP邱 1．Methods TheE coliBL21(DE3)wasculturedand inducedtoexpresstherecombinantPEB1proteinofCampylobacterjejuni，whichwasthenpurified withanickel-agarosecolumn，dialyzde inthedialysisbagandmeasurde byBCAproteinassaykit．The New ZealandrabbitswereimmunizedwiththerecombinantPEB1protein，and theIgG wasextractde from serum bysaltfractionation．ThetiterofantibodywasdetectedbyindirectELISAanddoubleagar diffusionmethods，andthespecificityofantibodywasanalyzde byW estern blotandslideagglutination test．Results TherecombinantPEB1proteinwith high puritywasobtained，and thepolyclonal antibodyagainstPEB1wasobtainde from therabbitsimmunizedwithPEB1．ThetiterofIgGextractde from serum ofrabbitswas1：2× 10 detectde by indirectELISA andwas1：8bydoubleagar diffusion．C嘴Id璐i帅 Thepolyelonalantibodywithhightiterisobtainde from therabbitsimmunized withrecombinantPEB1protein． [Keywo~s] Campylobacterjejuni；ReocmbinantPEB1protein；Polyclonalantibody lJiangsuMdeJ，December2011，37(24)：2891．2892．J