抗二氟沙星单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析.pdfVIP

核 农 学 报 2011，25(6)：1221—1224 122l JournalofNuclearAgriculturalSciences 文章编号 ：1000—8551(2011)06—1221—04 抗二氟沙星单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析 邹 明 陈杖榴 (1．青岛农业大学动物科技学院，山东 青 岛 266109；2．华南农业大学兽 医学院，广东 广州 510642) 摘 要：采用RT-PCR技术，从抗二氟沙星单克隆抗体 x1杂交瘤细胞株总 RNA中扩增 V 和v 基 因片 段 ，克隆入 pUC18载体，测序进行 (X1)可变区基因的克隆及序列分析。通过互联 网检索发现 V 和 V．． 基 因与 Ig同源，分别符合小鼠IgVH和 IgK基因特征。V 基 因全长363bp，编码 121个氨基酸；V 基因 全长为348bp，编码 l16个氨基酸。氨基酸序列分析结果显示 ，可变区含有明确的4个骨架区和 3个抗 原决定簇互补 区。本试验成功获得 X1株单抗的重、轻链可变区基 因，为基 因工程抗体的构建奠定 了基 础 。 关键词：二氟沙星；单克隆抗体 ；可变区基 因；克隆；碱基序列分析 CLONINGANDSEQUENCINGANALYSISOFVARIABLEREGIoN GENES OF ANTI．DIFLoXACIN M cAb ZOU Ming CHEN Zhang．1iu。 (1．CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao，Shandong266109 2．CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou，Guangdong 510642) Abstract：Thevariableregiongenesofheavychain(VH)andlightchain(VL)ofanti—difloxacinmonoclonalantibody (McAb)wereamplifiedbyRT—PCRfromtotalRNAextractedrfomX1hybridomacel1．PCRproductswereclonedinto pUC18vectorandsequencedbySanger’Sdideoxymediatedchain—terminationmethod．TheresultsshowedthatVHgene consistedof363bpencoding121aminoacidresidues；VLgeneconsistedof348bp encoding116amineacid residues， whichcontainfourFRsandthreeCDRs，respectively．ComparedwithmouseIgdatabase，theVHandVLregionsarein accordwiththecharacterizationofDNA sequencepresentin themouseIgregion．ThesuccessfulcloneofVHand VL genesofX1McAbmadeitasolidfoundationtotheconstructionofengineeringantibodyagainstdifloxacin． Keywords：difloxacin；McAb；variableregiongene；clone；basesequenceanalysis 二氟沙星 (Difloxacin，DIF)是继恩诺沙星 、达氟沙 免疫检测是 以抗原抗体间的特异性反应为基础， 星和沙拉沙星后又一个兽医专用的氟喹诺酮类药物 ， 具有敏感 、特异 、快速 ，且能一次检测大量样 品的