重组BJ46a蛋白抑制B16细胞的体外侵袭及转移.pdfVIP

第 4O卷 第 5期 解 剖 学 报 Vo1．40．No．5 2009年 1O月 ACTAANATOMICA SINICA Oct．2009 ·749 · 重组 BJ46a蛋白抑制B16细胞的体外侵袭及转移 徐剑文 林建银H 林旭 张晓艳 黄清玲 (1．福建医科大学分子医学研究中心；2．基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系，福州 350004) [摘要] 目的 探讨蛇毒金属蛋 白酶抑制剂 BJ46a的抗肿瘤侵袭及转移作用。 方法 以蛇毒金属蛋 白酶抑 制剂 BJ46a为 目的基 因，选择杆状病毒表达系统生产重组 BJ46a蛋 白，纯化并测定其生物学活性 ；利用 Alamarblue 法及 Transwell小室分析法评价重组蛋 白对小鼠黑色素瘤细胞B16体外生长、黏附、运动和侵袭能力的影响 (n=3)。 结果 经ProBond亲和层析纯化出的重组BJ46a蛋 白具有抑制基质金属蛋 白酶(MMPs)的活性；经重组BJ46a蛋 白处 理的B16细胞穿过 Matrigel的细胞数明显低于对照组 (P0．01)，抑制率为 84．8％。 结论 重组 BJ46a蛋 白能抑 制 B16细胞 的侵袭转移 。 [关键词] 蛇毒金属蛋 白酶抑制剂BJ46a；杆状病毒；重组蛋 白；侵袭小室；B16细胞系；侵袭；Alamarblue [中图分类号] R996．3 [文献标志码] A [DOI] 10．3969／j．issn．0529．1356．2009．05．011 RecombinantBJ46aproteinexertsinhibitioneffect on invasionandmetatasisofB16cellsin vitro XUJian—wen ，LINJian—yin ，LINXu。，ZHANGXiao—yan，HUANGQing．1ing (J．ResearchCemerofMolecularMedicine； 2．DivisionofAnatomy，HistologyandEmbryoloyg，FujianMedicalUniversity，Fuzhou 350004，China) lAbstract] Objective ToinvestigatetheeffectsofBJ46aoninvasionandmetastasisofmelanomacells．Methods A snakevenom metalloproteinaseinhibitorBJ46awasproducedinbaculovirusexpressionsystem．Then，recombinantfusionprotein waspurifiedbyProBondatthepointofmaximalexpression，SDS—PAGE andWesternblottingwereusedtodetecttheprotein expression．TheinhibitionactivityofmatrixmetaⅡopmteinasel(MMPs)wasdetectedbypurifiedBJ46aprotein．Theabilitiesof tumorcellproliferationandadhensionweredeterminedbyAlamarblueassay(n：3)．Theabilityoftumorcellinvasionwas identifiedbytranswellchamberinvitro(n=3)．Results TheactivityofMMPscouldbereducedbypurifiedBJ46aprotein．The abilityofB16cellstreatedwithrecombinantBJ46atoinva