人工脂质体染色方法的探究.pdfVIP

第34卷第2期 湖北大学学报( 自然科学版) V01 ．34 No ．2 1111丝! 旦 ! ! ! !塑! ! !璺! !生垡堑! ! !墼 ! ￥!型! ! ! 竺!塞 ! ! 竺! ! 』! 垒：! ! ! ! 文章编号：i 000—2375(20 12) 02—0 184～04 人工脂质体染色方法的探究 苏伟，阚文静，王绍华 ，彭方 ( 武汉大学生命科学学院，湖北武汉430072) 摘要在一定的温度 、渗透压、离子强度条件下，利用脂质体材料L- a phosph at i dyl c hol i n e制 备人工脂质 体，借助结晶紫 染液、美蓝染液、复红染液 、钼蓝染液、苏丹黑染液，对 脂质体进行染色，结果表明经结晶紫染色 后的脂质体在光学显微镜下具有形态大小分明、数量 多、立体结构清晰等特征 ．为丁优化染色方案，进一步获 取最佳染色配比，实验进行了梯度染色。得到了背景清晰、脂质体立体结构明显的最佳染色方法 ，解决 了光学 显微镜 下不易分辨脂质体的 问题，为后续实验的开展奠定基础． 关键词人工脂质体 ；染色；优化 中图分类号Q503；R94 文献标志码 0引言 人工脂质体是一种人工膜体系，可以形成单层膜，也可 以是连续的双层或多层复合脂质组成 的人工 小球囊，直径不等，约25～100 nm．科研工作者利用乙醇注入法Lf J 、薄膜分散法、超 声波分散法[ z] 、逆相 蒸发法u] 、冷冻干燥法等多种方法成功地制备 了人工脂质体 ．脂质体可 以和细胞膜融合，将药物或者小 分子送入细胞 内部 。应用于转基闲或药物制备．因此．脂质体是一种 良好 的生物学材料，被广泛应用于生 物领域、医学领域 ¨纠和药学领域M伽 ．197 6年德 国的马普生物物理研究所创建 了膜片钳技术阻 “] ，利用 双 电极钳制细胞膜 电位 ，记录离子通道 的离子 电流 ，反映了细胞膜单一 的或多个的离子通道分子活动． 膜片钳技术广泛地应用到平面双分子层、脂质体等人工标本上 ，对细胞膜离子通道进行性质鉴定及动力 学研 究，以阐述离子通道与细胞膜相互作用 的机制，因而对脂质体的形态、结构有较高 的要求 ． 脂质体 的制备对后续定性和定量实验有着重要作用 ，所 以，在制备脂质体 的过程 中，研究者需要找 到一种观察脂质体 的形态特征、预测脂质体制备效果的方法．传统研究方法 中，电子显微镜成为观察脂 质体 的一种方法，但具有一定 的局 限性，只能观察平面结构，成本较高，且不能随时观察．本研究利用染 色的方法对脂质体进行观察，通过不同染色方法 的对 比，将染色效果最佳 的方法进行优化 ，从而能够在 光学显微镜下观察到立体结构清晰、形态完整 的脂质体．该方法简单、可行． 目前财脂质体染色的研究 尚 少见报道 ，本研究对脂质体的染色进行了，探 究，建立了一种观察脂质体 的新方法 ，为后续实验需要打下 基础 ． 1材料和仪器 1．1材料h—ph ospha t i dyl c hol i n e( L- a一磷脂酰胆碱) ( s i gma) ，氯化钠( 国药集 团化学试剂有限公司， R) ，结晶紫( 沈阳试三生化科技开发有限公司) ，美蓝( 上海易利生物科技有限公司) ，复红( 北京恒业中 远化工有 限公司) ，钼蓝，苏丹黑( 沈阳市试剂三厂) ． 1．2试剂l ％的结晶紫染液，0．01％的美蓝染液 ，复红染液，钼蓝染液，苏丹黑染液参考 《微生物学实 验》进行配制，蒸馏水，三 氯甲烷( 国药集团化学试剂有限公司 ， R) ． 收稿开 期：2011—1l 一25 基金项目：回家自然科学基金( 310 7D03 8) 、教育部博士 点基金( 20 100141 120 003) 资助 作者简介：苏伟( 1989一) ，男，本科生；彭 ，通信作者，副教授，E- mai l ；f angpen92@yahoo ．∞札cn 第2期 苏伟等：人工脂质体染色方法的探 究 1．3仪器玻璃珠，试管，摇床 ，烘箱，显微镜( Ol ympu s BX5 1) ． 2方法 2．1脂质体的制备取l 肛g ￡m—ph os ph at i dy l c hol i n e