冀南地区鸡肾型和腺胃型传染性支气管炎病毒的分离鉴定.pdfVIP

维普资讯 WWW ．zgxmzs．com 试验研究 E—mail：jrxmsy@126．com 冀南地区 鸡肾型和腺胃型传染性支气管炎病毒的分离鉴定 董爱英 ，范翠蝶 ，马兴树 。 (1．河北省南宫市职教 中心，河北南宫 055750；2．河北天丰家禽育种有限公司，河北石家庄 051430； 3．河北工程大学农 学院分子生物 学实验室，河北邯郸 056021) 鸡传染性支气管炎 (InfectiousBronchitis，IB)是 3000rpm离心 10分钟 ，取上清夜 ，加青 、链霉素和卡 鸡的一种急性 、高度接触性的病毒性呼吸道疾病 ， 那霉素各 4000u(ug)／ml，置冰箱 中作用 4小时后，滤 其特征为气管哕音、咳嗽和打喷嚏。1930年在美国 过除菌后备用。 · 北达科他州首次发现以来 ．目前已分布于世界各养 1．2鸡胚接种和传代 禽地区。IB病毒血清型复杂，临床表现多样 。如主要 取上述处理好 的病料悬液经尿囊腔接种 10日 症状为异常呼吸音 、咳嗽 、喷嚏 、张 口呼吸的呼吸型 龄 SPF鸡胚，每胚接种 O．2毫升，置 37~C孵化箱 中孵 IB；产蛋鸡产蛋迅速下降(20％～80％)、蛋壳异常及 育。24小时内死亡者废弃 。每 日照蛋2次，无菌收集 产畸形蛋的生殖型 IB；以白色下痢 、轻度或无呼吸 接种后 24～72小时死亡胚和活胚的尿囊液 ，用此液 症状 的肾型 IB(NIB)；以结膜炎 、喷嚏、头面部水 再接种下批 10～11日龄 SPF胚 ，方法剂量同上。如 肿 、头定向障碍为主的肿头综合征 IB；独立导致成 此连续盲传至 6代 。再传第 6代的过程 中，取 出死 年鸡死亡 、感染后引起胸肌松弛、腹泻为主的793／B 胚 ．其余胚连续孵化至接种后第 8天 。收集各代鸡 或 7／91变异毒株引起 的 IB；近年来 国内报道 以极 胚尿囊液 的同时，观察鸡胚及绒毛尿囊膜的病变。 度消瘦 、拉稀 、腺 胃肿大 、腺 胃壁增厚及黏膜 出血 、 1．3病原的理化特性鉴定 溃疡为主的腺 胃型 IB(PIB)。免疫接种是控制 IB的 PH值稳定性试验和氯仿敏感试验按常规方法 有效措施。大量研究结果表明，应用地方 IB分离株 进行。 制备的疫苗具有较好的免疫效果 。为此 ，我们在鸡 1．4电子显微镜观察 病诊治实践中，首次 自河北省南部地区不 同发病鸡 取第 3代鸡胚尿囊液，3000rpm离心 2O分钟后， 群分离到 四株肾型 IB病毒和两株腺 胃型 IB病毒 ， 取上清液再经 16000rpm于4℃离心2小时．弃上清， 为有效预防本地 IB奠定 了实验基础 。 取沉淀用适量 PBS溶解后，2％磷钨酸负染色，电镜 1材料与方法 观察 。 1．1病原分离 1．5血细胞凝 集fHA)试验 1．1．1NIB病毒 的分 离 分别采 自邯郸市 (H 将各毒株的尿囊液与等量 2％胰蛋 白酶混合 ， 株)、武安市 (W 株)、沙河市 (S株)和邢 台市 (X株) 37．4℃水浴作用 4小时，期 间振摇数次 。取 出后于 28～46 日龄发病鸡群病变明显 的肾脏 。将不同鸡群 4℃放置 24小时 ，按常规方法测定胰蛋 白酶处理前 采集的肾脏分别称重，剪碎 ，按 1：5(w ：V)加灭菌 后尿囊液的HA滴度。 PBS，制成悬液后 ，3000rpm离心 1O分钟 ，取上清 1．6人工感染试验 夜，加青、链霉素和卡那霉素各 4000u(ug)／ml，置冰 将饲养至 35日龄的健康小公鸡随机分成 7组． 箱中作用 4小时后，微孑L滤膜过滤后备用。 每组 1O只，1～6