沙拐枣d na 提取方法改善及pcr 扩增检测.pdfVIP

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2017-09-13 发布于山东
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沙拐枣d na 提取方法改善及pcr 扩增检测.pdf

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28　　　草　业　科　学 23 卷 10 期 10/ 2006 PRA TA CUL TU RAL SCIEN CE Vol23 ,No 10 沙拐枣 D NA 提取方法改进及 PCR 扩增检测 1 ,4 2 3 4 5 5 4 潘和平 ,晋玲 ,高天鹏 ,张晓苏 ,常根柱 ,时永杰 ,杨具田 ( 1 甘肃农业大学动物科技学院 ,甘肃兰州 730070 ; 2 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 ,甘肃兰州 730000 ; 3 兰州大学生命科学院 ,甘肃兰州 730000 ; 4 西北民族大学生命科学与工程学院 ,甘肃兰州 730030 ; 5 中国农科院兰州畜牧与兽药研究所 ,甘肃兰州 730050) 摘要 :利用改进的提取沙拐枣 Cal l i g on um m ong ol icum DN A 的 C TAB 方法 , 从沙拐枣当年鲜根提取总 DN A , 以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测 ,并进行 PCR 扩增试验。结果显示 ,所提取的 DN A 片段大小在 20 kb 以上 ,OD260 / OD280 比值为 1 880 ～1900 ,OD260 / OD230 比值为 2000 ～2040 ,DN A 的浓度 μ ( ) 0 380～0470 g/ mL ,DN A 纯度较高 ,可直接用于随机扩增的 DNA 多态性 RA PD 标记 ,条带清晰、迁移率低而整齐。关键词 :沙拐枣鲜根 ;DN A ;提取 ; PCR 中图分类号 :S793 1 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :100 10629 (2006) 　沙拐枣 Cal l ig on um m ong ol icum 是荒漠地区 12 试验方法固沙造林的先锋植物 , 同时又是沙区重要的超 12 1 DN A 提取　取新鲜细根 2 g ,1 年与 3 年生旱生牧草植物 , 它不但具有抗旱、抗高温、抗盐长龄各 2 个重复 ,分别标记为 A 1 、A2 、B 1 、B2 。液碱、抗沙埋的能力 ,而且生活力强 ,根系发达 , 易氮中研磨成粉 ,立即转移到 10 mL 离心管中 ,加于繁殖和生长迅速[ 1 ] 。由于它蕴含着珍贵的抗 ( 2 mL C TAB 提取液 2 % C TAB , 100 mmol/ L 旱、抗高温等基因 ,所以受到了许多植物学家的 Tri s - H Cl ,14 mol/ L N aCl ,20 mmol ED TA) 和重视 ,研究和利用沙拐枣的抗逆基因 ,将会成为 μ β 30 L - 巯基乙醇 ,混匀 ,65 ℃保温 40 min ;加人们关注的一个热点。提取高质量沙拐枣 DN A ( ) 入等体积氯仿/ 异戊醇