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生命科学趋势 2004 年 4 月 第 2 卷 第 1 期 Trends in Life Sciences 富含多糖草莓果实总 RNA 提取方法的改进 周波 张旸 (东北林业大学花卉生物工程研究所 哈尔滨 150040) 责任编辑： xmale 摘要：以草莓果实为模式实验材料，将 Chomczynski(6)提出的常规 RNA 提取方法与 Kenneth[9] 等提出的改进方法相结合，并做了进一步改进，建立了一种简单实用的从富含多糖植物材料 中提取总 RNA 的方法。该方法先利用冷的丙酮去除色素类物质，再利用乙二醇丁醚去除多糖， 从而有效克服了富含色素和多糖类物质植物材料中提取 RNA 的困难，获取的 RNA 样品在纯 度和浓度上都可以满足 PCR 及 Northern 杂交等分子生物学实验的要求。 关键词：多糖，草莓果实，总 RNA, 提取方法 Abstract: A simple and convenient extraction method of total RNA from plant materials with abundant polymeric carbohydrates was established by using strawberry fruit as model experimental material. It was a further improved method of combining the conventional total RNA extraction method developed by Chomczynski with an improved extraction method developed by Kenneth. The key improved points are clearing pigment first by cooled acetone, and then eliminating polymeric carbohydrates by ethylenglycol monobutyl ether. It was effectively overcome the obstacle for total RNA extraction from plant materials with abundant pigment and polymeric carbohydrates. The purity and concentration of extracted total RNA can meet the demand of molecular biology experiment such as PCR and Northern hybridization. Key words: Polymeric carbohydrates, Strawberry fruit, Total RNA, Extraction methods 近年来，随着生物技术的进步和发展，人们对植物的许多生理特性进行到了分子水平的 研究。许多重要基因的克隆和表达研究，需要从植物材料中提取高纯度的 DNA 或 RNA 。由 于材料本身的内源 RNA 酶和外源 RNA 酶的影响，RNA 比DNA 更容易降解。因此植物总 RNA 的提取条件比 DNA 要苛刻。而且很多植物材料中，或富含类黄酮和酚类化合物，或富含多糖， 或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，增加了 RNA 的提取难度。 草莓果实富含芳香族的酚类化合物、类黄酮类色素和多糖类化合物，使其核酸的提取变 得困难。特别是总 RNA 的提取，常规提取方法很难奏效。而且某些一步法的试剂盒对其多糖 的处理效果也不明显。本实验针对这些难题，在前人试验研究[1-8]基础上，对常规的提取方法 进行了改进。用丙酮去除大部分类黄酮类色素，用乙二醇丁醚去除大部分多糖。产物在纯度 和浓度上经过试验验证，可以满足反转录、PCR 、Northern 杂交等分子生物学的研究需要。 1 材料与方