显示细胞dna 和rna 的甲基绿一派洛宁技术的改善.pdfVIP

维普资讯 江西中医学 院学报 2005年2月第 17卷第 1期 IOURNALOFJIANGXIUNIVERSITYOF丁口订 2005Vo1．17No．1 ． 显示细胞 DNA和 RNA的甲基绿一派洛宁技术的改进 ★ 胡敏 肖纯 (江西中医学院附属医院病理室 南昌330006) 关键词 ：核酸染色；甲基绿一派洛宁 中图分类号：R392—33 文献标识码：A 核酸染色应用较广泛，在临床上多用于免疫性 钟 (如在37℃的情况下，2O～3O分钟即可)；(4)取 疾病、肿瘤 的诊断和研究，显示细胞 DNA和 RNA 出切片，略洗，用细滤纸吸干 ；(5)迅速经丙酮分化、 的甲基绿．派洛宁技术是最常用的方法之一，它们具 脱水 30秒 ，镜下控制分色；(6)丙酮．二甲苯 (1：1)透 有相对的特异性。由于这种技术在染色时出现的易 明，中性树胶封固。结果：DNA呈蓝绿色，RNA呈 变性和反复无常，效果不一致，是比较难掌握的染色 红色。背景无色。 技术。本文结合我们的研究工作 ，采用改 良的Kur． 1．4 DNA和 RNA的抽提技术 要明确地肯定切 nick(1955)法取得较好的效果，报道如下： 片中的红色胞浆性成分是 RNA则必须用核糖核酸 1 材料与方法 酶的消化进行对照染色[¨，或用过氯酸抽提技术 。 1．1 材料 临床近年活检材料 中腺癌 、粘液腺癌、 较前者价廉，并且可单独抽提 RNA或RNA、DNA 低分化癌等石蜡切片标本 ，骨 肉瘤及实验动物肝、 两种核酸。 胰、淋巴结等新鲜组织 ，Carnoy氏液 固定 2～4小 (1)过氯酸单独抽提 RNA。将切片放在 1O％ 时，10％中性福尔马林 固定 1～2天的石蜡切片标 过氯酸水溶液中，在4℃作用 12～18小时。 本。试剂 ：甲基绿、派洛宁G(购 自上海化学试剂公 (2)过氯酸同时抽提 RNA和DNA。将切片放 司，批号，氯仿、正丁醇、醋酸、醋酸钠均 在5％过氯酸水溶液中，6O℃作用 20--50分钟。 为AR试剂，购 自上海化学试剂公司。 不论采用哪种抽提技术 ，切片经抽提后都要用 1．2 试剂配制 (1)甲基绿．派洛宁染色液的配制： 1％碳酸钠液中和 1～5分钟 ，然后以流水洗 ，再经甲 2％甲基绿水溶液(经氯仿抽提)8mL，2％派洛宁G 基绿．派洛宁染色。 水溶液 (经氯仿抽提)5mL，醋酸．醋酸钠缓冲液 2 结果 (pH4．8)30mL，此液在染色时混合，尽量少配。 普通染色 ( )片中较难区别有无细胞凋亡 。而 (2)醋酸．醋酸钠缓冲液：醋酸钠 410nag，冰醋 改良甲基绿．派洛宁染色可以较明确地显示细胞凋 酸0．3mL，蒸馏水 5OmL。 亡的情况；凋亡细胞的胞浆内核糖核酸呈派洛宁阳 (3)甲基绿和派洛宁G的抽提：分别将 甲基绿 性 (红色)，胞核内脱氧核糖核酸 甲基绿着染(绿色)； 和派洛宁配成 2％水溶液，待两液充分溶解后，分别 坏死细胞核呈绿色，胞浆内常有RNA的损失，故派 置入容量 250mL的分液漏斗中，加等量的氯仿充 洛宁不着色而为阴性。 分混和，静置分层，使下层有着色的氯仿流去。用氯 3 讨论 仿抽提的甲基绿，其中流出的是结晶紫或甲基紫。 3．1 染色机理 (1)通过两种染料的分散度和两种 用氯仿抽提的派洛宁，其中流出的红色成分不清楚。 核酸的结构密度来解释：甲基绿和派洛宁都是碱性 甲基绿一般要抽提6次，派洛宁一般要抽提4 染料，甲基绿分子量大、分散度低，较易进入疏松结 次，两种染色液经抽提后，分别放入容量 200mL的 构的DNA中，派洛宁分子量较小、分散度高，较易