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第 23 卷第 1 期 第 三 军 医 大 学 学 报 Vol. 23 , No. 1
2001 年 1 月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE Jan. 2001 119
( )
文章编号 2001 技术方法
一种改进的核转录因子的电泳迁移率改变分析法
A modified electrophoretic mobility shift assay
( )
王 勇 ,黄文华 第三军医大学附属西南医院烧伤研究所 ,重庆 400038
提 要 : 目的 建立一种简便、实用、成功率高的电泳迁移率改变分析法。方法 参照国内外介绍的实验方法并加以改进 ,并
结合本室的实际情况。主要步骤为核蛋白快速抽提与定量 ,探针标记与纯化 ,DNA 与蛋白质的结合 , 电泳及显影。结果 此方法操
作时间较短 ,简化了核蛋白抽提 ,且省去了繁锁的干胶步骤 , 图像清晰 ,有可比性及重复性。结论 此方法本室运用过多次 ,稳定可
靠 ,值得应用与推广。
(
电泳迁移率改变分析法 Electrophoretic mobility
) 1. 2. 3 探针标记 分别设 A 、B 两管 ,如下 :
shift assay , EMSA 是一种运用非变性聚丙烯酰胺电泳
及放射自显影技术分析细胞内核转录因子结合活性的 A B
μ μ
寡聚核苷酸单链探针 P 1 l = 10 pmol P 1 l
1 2
方法。目前国内外的方法操作较繁锁 ,不易掌握 ,因此 ( )
T 多聚核苷酸激酶 Promega μ μ
4 1 l = 10 u 1 l = 10 u
10 ×T buffer μ μ
寻找更简便、稳定、可靠的 EMSA 方法是研究细胞信号
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