传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp5在真核细胞中的重组表达及鉴定.pdfVIP

中国动物传染病学报 2012，20(2)：11-16 ChineseJoumalofAnimalInfectiousDiseases · 研究论文 · 传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp5在真核细胞中 的重组表达及鉴定 耿 阳，牟小东，刘 然，边葶苈，廖 敏，周继勇 (浙江大学农业部动物病毒学重点实验室，杭州310058) 摘 要：本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 (Infectiousbronchitisvirus，IBV)毒株的RNA为模板 ，通过RToPCR扩增获得 IBV非结构蛋白5(non．structuralprotein，nsp5)h基因片段后 ，构建了杆状病毒重组质粒 IBVnsp5．Bacmid。IBVnsp5．Bacmid转 染sf9细胞，获得nsp5重组杆状病毒，经 (immunoflhorescenceassay,IFA)和Westernblot检测到转染细胞表达的nsp5蛋白。 进一步从感染的细胞中纯化重组蛋白，并用纯化的蛋白免疫小鼠制备了抗nsp5的多抗血清，该多抗血清可检测到IBV四川株 SC021202感染的DF一1细胞中特异性的nsp5蛋白。结果表明IBVnsp5在Bac．to．Bac真核表达系统中获得了成功表达，而且具 有 良好的免疫原性和反应原性。 关键词：传染性支气管炎病毒 ；非结构蛋白5；Bac．to．Bac杆状病毒表达系统 中图分类号：$852．6591 文献标志码 ：A 文章编号：1674-6422(2012)02-0011-06 EXPRESSIONANDCHARACTEIUZATIoN oFRECoMBINANTNoN． STRUCTURALPRoTEIN 5oFINFECTIoUSBRoNCHITISVIRUS GENGYang，MOU Xiao-dong，LIURan，BIAN Ting—li，LIAO M in，ZHOU Ji-yong K(eyLaboratoryofAnimalVirologyofMinistryofAgncu~ure,ZhejiangUniversity,Hangzhou310058,China) Abstract：Littleisknownaboutthefunctionofnon-structuralproteins5(nsp5)ofavianinfectiousbronchitisvirus(IBV)．Inthisstudy, IBVnsp5wasamplifiedinRT-PCRusingRNAofnephropahtogenicIBV strainastemplate．TherecombinantplasmidIBVnsp5一Bacmid wasconstructedbasedonBac-to—Bacbaculovirusexpressionsystem na dtrnasfectedintoSf9cells．Theexpressionofrecombinnatnsp5in Sf9cellswasconfirmedbyIFATnadWestern blotna alysis．Thepolyclonalnatiserum againstnsp5waspreparedusingrecombinantnsp5 purifiedfrom transfectedSf9cellsna ddemonstratedtoreactwiht IBV SC021202infectedDF．1cellsinIFAT．Theresultsindicatedthat IBV nsp5wassuccessufllyexpressedineukaryoticexpressionsystem nadhadgoodna genicity． Keywords：Infectiousbronchitisvirus；non·s·tructuralprotein(nspS)；Bac-t·o-·Bacbaculovirusexpressionsystem 鸡的传染性支气管炎 由传染性支气管炎病毒 IBV特殊的转录机制导致该病毒容易发生变异，造 (Infectiousbronchitisvirus，IBV)感染引起，是一