肌萎缩侧索硬化患者脑脊液对间充质干细胞增殖分化的影响.pdfVIP

· 328 · StrokeandNervousDiseases，Dec2012，Vo1．19，No．6 · 论 著 · 肌萎缩侧索硬化患者脑脊液对间 充质干细胞增殖分化的影响 王云甫 杨 超 孙延鹏 孙 强 卢祖能 【摘要】 目的 观察肌萎缩侧索硬化患者脑脊液 (cerebrospinalfluid，CSF)对大 鼠骨髓问充质干细胞 (mesenchymalstemcells，MSCs)I~殖分化的影响，探讨MSCs经CSF内移植治疗肌萎缩侧索硬化(amyotro— phiclateralsclerosis，ALS)的启动机制。方法 通过密度梯度离心联合贴壁培养法分离培养大鼠MSCs，取生 长状态 良好的第3代细胞，按0．5x10cells／孔的浓度接种于24孔培养板中，分别加入ALS患者 CSF、病例 对照组CSF以及和等量条件培养液 (空白对照)共培养7d。MTI法分别检测共培养 1d、4d、7d后的MSCs 增殖能力，免疫荧光法检测神经细胞特异性表面标志物巢蛋白(Nestin)和神经元特异性烯醇化酶(neuron- specificenolase，NSE)的表达水平。结果 (1)MSCs共培养 1d后 ，各组细胞形态学无明显变化；4d后，ALS 患者组部分细胞开始收缩并出现细胞突起等形态学变化，病例对照组可见少量细胞出现细胞突起等形态学 变化 ，空白对照组细胞仍无明显形态学变化；7d后 ALS患者组及病例对照组突起细胞数较前明显增多，空白 对照组仅可见少量突起细胞 ；(2)ALS患者组及病例对照组 1、4、7d的细胞平均吸光度值 (A)明显高于空白 对照组(P()．)【1)，但 ALS患者组及病例对照组无明显差异 (P0．05)；(3)MSCs共培养7d后，AlAS患者组 和病例对照组Nestin、NSE染色均有阳性细胞表达，而空白对照组仅有极少量表达；AIS患者组 Nestin及 NSE染色阳性率均显著高于病例对照组 (PO．05)。结论 MSCs分化需要一定的微环境，ALS患者 CSF 能诱导其分化成为神经元样细胞，可能在 MSCs定向分化和神经组织修复机制的启动环节中起作用。 【关键词】 肌萎缩侧索硬化 骨髓间充质干细胞 干细胞移植 微环境 【中图分类号1 R746．4 【文献标识码】 A 【文章编号】 1007—0478(2012)06-0328—04 [DOll 10．3969／j．issn．1007—0478．2012．06．002 rrheEffectofthecerebrospinalfluidofamyotrophiclateralsclerosispatientsontheproliferationanddiffer— entiationofbonemarrowmesenchymalstem cells Wang~nfu ，YangChao，SunYanpeng ，eta1． DP— partmentofNeurology，TaiheHospitalofHubeiUniverisityofMedicine，Shiyan442000 [Abstract] Objcetive Tostudytheeffectofthecerebrospinalfluid(CSF)from amyotrophiclateral sclerosis(AIS)patientson theproliferationand differentiationofboBemarrow mesenchymalstem cells (MS )inrat，andexploretheactivatedmechanism ofMSCstransplantati0nthroughCSF fortreatingALS． Methods RatMSCswereisolatedb