百里香属植物ISSR—PCR和SRAP—PCR体系的确立及优化.pdfVIP

维普资讯 植物资源与环境学报 2008，17(2)：1—8 JournalofPlantResourcesandEnvironment 百里香属植物 ISSR—PCR和 SRAP—PCR体系的确立及优化 权俊萍一，袁菊红 ，穆红梅 ，张明霞 ，李乃伟 ，夏 冰① (1．石河子大学农学院，新疆 石河子 832000；2．江苏省 ·中国科学院植物研究所，江苏 南京 210014； 3．江西财经大学资源与环境管理学院，江西 南昌330032) 摘要：通过对 PCR扩增体系中的模板DNA用量，Mg 、dNTPs和引物浓度的单 因子实验 ，分别建立了适合百里香 属 (ThymusL．)植物总DNA的ISSR—PCR及 SRAP—PCR优化反应体系。ISSR—PCR优化反应体系为：反应总体 积20 ，含模板DNA30ng、M 3．75mmol·L～、dNTPs0．20mmol-L～、引物0．3mmol·L 和 TaqDNA聚合 酶 1U。SRAP—PCR优化反应体系为：反应总体积20 ，含模板 DNA30ng、M 2．50mmol·L～、dNTPs0．10 mmol·L～、引物0．4mmol·L 和 TaqDNA聚合酶 1U。运用优化的反应体系对百里香属植物地椒 ( quinque- costatusCelak．)、地椒的亚洲变种 [ quinquecostatusvat．asiaticus (Kitagawa)C．Y．WuetY．C．Huang]和百里香 ( mongolicusRonn．)15个居群的总 DNA进行了ISSR和 SRAP初步分析，获得了较好的扩增结果。 关键词：百里香属 ；ISSR—PCR；SRAP—PCR；优化反应体系 中图分类号：Q946—33；Q523 ．8 文献标志码 ：A 文章编号：1004—0978(2008)02—0001—08 Establishmentand optimization ofISSR．PCR and SRAP．PCR reaction svstemsofThymusL． QUANJun—ping ，YUANJu-hong ，MUHong—mei，ZHANGMing-xia，LINai-wei，XIABing’ (1．CollegeofAgriculture，ShiheziUniversity，Shihezi832000，China：2．InstituteofBotany，Jiangsu ProvinceandtheChineseAcademyofSciences，Naniing210014，China：3．ResourceandEnvironment ManagementInstitute，JiangxiUniversityofFinanceandEconomics，Nanchang330032，China)，J． PlantResour．Environ．2008．17(2)：1—8 Abstract：BasedonthesinglefactorexperimentoftemplateDNA amountand concentrationsofMg“． dNTPsandprimerin PCR amplification system ．theoptimalreaction systemsofISSR．PCR andSRAP． PCR oftotalDNA from ThymusL．speciesareestablished．Theoptimalreactionsystem ofISSR．PCR is asfollows： totalvolume20 L， containing templateDNA 30ng， Mg 3．75mmol·L～ ， dNTPs 0．20mmol ·L～ ．primer0．3mmol ·L and1U qDNA polymeraseenzyme．Theoptimalreaction system ofSRAP．PCR isas