黄曲霉毒素的检测方案—HPLC法.pdfVIP

Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园 7号楼 1、3层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn   黄曲霉毒素的检测方案—HPLC法  天美（中国）科学仪器有限公司  甄蕊  黄曲霉毒素(aflatoxin，简称为AF)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素，它 们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相 关的产品中。黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1是二氢呋喃氧杂萘邻 酮的衍生物，目前已分离鉴定出12种，其中M1和M2主要存在于牛奶中，B1为毒 性及致癌性最强的物质。近年来，国家制定了多个检测黄曲霉毒素的方法标准，并同时 出台食品及饲料中黄曲霉毒素的限量要求。 HPLC是近几年发展起来的检测黄曲霉毒素的方法，主要是采用反相分析系统，使 用荧光检测器检测，同时分离多种黄曲霉毒素。HPLC方法具有同时分离、分析样品中 多种黄曲霉毒素的功能和快速、高效、灵敏、定量准确的优点，而且不受样品的沸点、 热稳定性和分子量等的限制；同时荧光检测器具有灵敏度高、选择性好和干扰峰少的优 点，因此，使用HPLC法配荧光检测器已经成为检测黄曲霉毒素的主要测定方法。 1、HPLC柱后过溴化溴化吡啶衍生方案  根据GB/T23212-2008《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2 的测定液相色谱-荧光检测法》，使用过溴化溴化吡啶作为衍生试剂，采用日立液相色谱 仪配柱后衍生单元和荧光检测器，同时检测牛奶中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1。 检测结果优于国家标准要求，充分体现了日立荧光检测器的高灵敏度，满足了超低黄曲 霉毒素的含量的同时分析测定，适用与常规监督检测。 1.1色谱条件 柱：HitachiLaChromC18(5μm)4.6mmI.D.x250mmL 柱温：35℃ 流动相流速：1.0mL/min 衍生试剂：0.05g/L过溴化溴化吡啶 衍生液流速：0.45mL/min 衍生温度：35℃ Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园 7号楼 1、3层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 检测波长：Ex=355nm；Em=430nm 进样量：20μL 流动相：CH CN:CH OH:H O=20:20:60 3 3 2 1.2样品前处理 称取10g样品于25mL离心管中，10000转/分钟离心15min，将上清液全部移 入黄曲霉毒素亲和柱，用10mL水清洗柱，等空气进入2-3mL，用2mL乙腈将样品洗 脱下来，收集所有的洗脱液，氮吹仪或水浴加热催干，加入流动相1mL，涡旋，溶解样 品，过0.45μm滤膜过滤，待机测定。 1.3实验结果