分子分型技术在弧菌研究中的应用进展.pdfVIP

第 28卷第 4期 海 洋 科 学 进 展 Vo1．28 No．4 2O1O年 10月 ADVANCES IN M ARINE SCIENCE ()ctober，2O10 分子分型技术在弧茵研究中的应用进展 江 晓 。，任春华 ，胡超群 (1．中国科学院 南海海洋研究所应用海洋生物学重点实验室 ，广东 广州 510301；2．中国科学院 研究生 院，北京 100049) 摘 要 ：弧菌(Vibrio)是各种海洋环境 的正常细菌 区系的重要 组成成 分，也 是水 生动物 与人类 的重要病原之一。 近年来 出现 了各种灵敏、快速、自动化且易于操作 的分子分型方法，它们在弧菌分型 中的应用 ，对揭示弧菌菌株在 分子水平上的变异和进化规律、寻找病原及调查传播途径、控制疾病暴发有至关重要 的怍用。应用于弧菌的各种 分子分型方法可分为依赖于 PCR分型技术和不依赖于 PCR分型技术，各种分型技术具有各 自的优、缺 点；其 中前 者由于高度的特异性、敏感性、可操作性、准确性、快速和 费用低廉而得到广泛的应用 ，但重复性较差；后者 由于基 于生物体全基因组的操作 ，所以相对于依赖于 PCR技术的分型方法结果更为可信，缺点是操作繁琐 ，对某些特殊 细菌不适用。现今 的国内外弧菌分型 中公认 的 “金标准”的 PFGE方法与近年来新发展起来 的IRS—PCR分型方法 结合 ．同时利用现有的数据建立国际分型数据库，实现信息和技术标准与共享，是弧菌分型的较好方法。 关键词 ：弧菌 ；分子分型 ；聚合酶链 式反应技术 (PCR) 中图分类号：R378．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：l6716647(2010)04·056307 弧菌属 (Vibrio)隶属于弧菌科 ，是一类在世界范围内广泛分布的革兰 氏阴性菌 。自然界中弧菌种类特 别丰富，现在 已报道的共有 200多种 。其中至少有 12个种，如霍乱弧菌 ( io． olerae)、副溶血弧菌(． 声“r““P o fus)、创伤弧菌 (V．vulnificus)和拟态弧菌 (V．mimicus)等对人体有很强 的致病性 ，可引 起人体严重腹泻并脱水 ，或者出现伤 口感染、中耳炎及败血症等；此外 ，弧菌也是水产养殖 中最为常见、流行 性最广和危害严重的细菌性病原之一。因此，找到一种灵敏度高、分型力和重复性俱佳的方法用于寻找病 原 、调查传播途径、控制疾病的暴发和流行，是当务之急 j。 目前，用于弧菌的分型技术主要应用于同种弧菌菌株间，可分为表型技术和分子分型技术两大类 。 表型分型技术包括生物分型、血清分型、药敏分型、噬菌体生物分型和多位点酶凝胶 电泳技术 (Multilo CUSEnzymeElectrophoresjs，MIEE)，这些方法虽然比较有效 ，但在判断那些具有相似表型但遗传学上没 有关联的菌株时往往缺乏灵敏度，且在分型与重复性上都受到一定限制 ，如诊断血清与标准噬菌体的获得 、 病原本身生理因素对分型的影响等 ]。目前应用于弧菌分型的表型分型技术有血清学分型和噬菌体生物分 型两种 。 分子分型技术主要包括依赖于聚合酶链式反应技术 (PolymeraseChainReaction，PCR)的分型技术和 不依赖于 PCR的分型技术 ，其 中前者由于高度的特异性 、敏感性、可操作性 、准确性 、快速和费用低而得到广 泛应用；后者基于生物体全基因组的操作 ，所以相对于依赖 PCR技术 的分型方法结果更为可信。 1 依赖于PCR的分子分型方法 PCR反应可以在较短的时间内将特定的脱氧核糖核酸 (DNA)序列进行大量扩增 ，从而达到可以用琼 收稿El期 ：2009—0812 资助项 目：国家重点基础研究发展计划项 目～ 海水鱼类病原弧菌致病基 因与疾病发生(2006CB1618030)；中国水产科学研究院水产 种质资源与养殖技术重点开放实验室开放基金课题—～不同养殖水域溶藻弧菌基 因型的比较研究 作者简介 ：江 晓(1983)，女，湖北黄冈人，硕士 ，主要从事海洋水产病害控制及生物技术方面研究．E—mail：jiangxiao4367@126．com *通讯作者 。博士，研究员 ，博士生导师 ，主要从事海洋水产增养殖、病害控