含苏氨酸操纵子重组质粒的构建及其对大肠杆菌.pdfVIP

!#$%’ ($)% 研究报告 微生物学报 !#$ %’()(*(+$ ,-$ （）： ； ! # #$ % # ! ’() *++ ； ,--. +++$ % *+ /. $$ % $#0 1 ： 2334 0056789(:; = (? ?90 (?3(=?86?9 含苏氨酸操纵子重组质粒的构建及其对大肠杆菌 苏氨酸积 ! 累的影响 ， ， $ * $ * * * * $ * ! 张雪 ，闫继爱 ，于雷 ，张国强 ，张芸 ，陈宁 ，温廷益 $ （天津科技大学生物工程学院，天津 A++!#H ） * （中国科学院微生物研究所，北京 $++$+$） 摘要：【目的】通过分子生物学手段构建重组质粒，将其转入野生型大肠杆菌OA$$+ ，分析含苏氨酸操纵子基 因的质粒及质粒定点突变解除反馈抑制时，对 苏氨酸积累的影响。【方法】以 染色体 为模板， PG OA$$+ Q.B 扩增苏氨酸操纵子基因，即启动子 、编码前导肽基因 以及 、 、 基因，通过重叠延伸 R/S ./’01 #2’0 #2’! #2’3 #2’4 R/S 的方法对 #2’! 基因定点突变，解除苏氨酸对它的反馈抑制，构建出重组表达质粒 4OTK$$* 和 ， 发酵实验测定 苏氨酸的产量。【结果】经 发酵罐发酵产酸实验， 的 苏氨酸产量 4OTK$A! # P PG # P OA$$+ PG 为 ，携带含苏氨酸操纵子质粒的 菌株 苏氨酸产量为 ，质粒上 + U+A V + U++! W0 P OA$$+ PG * U#+ V + U $$# W0 P #2’! 解除反馈抑制后， 苏氨酸的产量增加到 。【结论】过表达苏氨酸操纵子基因可以使 苏氨 PG U**A V $U*H W0 P PG 酸积累，进一步解除 基因的反馈抑制，可以增强 苏氨酸积累的效果，为 苏氨酸工程菌改造的进一步 #2’! PG PG 研究奠定了基础。 关键词： 苏氨酸；重叠延伸 ；大肠杆菌；发酵；定点突变 PG R/S 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） 1AA 1A# B +++$G*+ *++ +#G+#$G+ 苏氨酸是人和动物所必需的 种氨基酸之 度慢等弱点，是目前工业生产中难以解决的问题。 PG @