鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立.pdfVIP

动物医学进展 ，2011，32(10)：l一5 ProgressinVeterinaryM edicine 鹿流行性 出血病病毒双抗夹心 ELISA方法的建立 陈 兵 ，李健波 ，杨俊兴 ，阮周曦 ，孙 洁 ，张彩虹 ，刘建利 ，花群义h，周晓黎 (1．深圳 出入境检验检疫局，广东深圳 518001；2．云南出入境检验检疫局，云南昆明 650228) 摘 要：为建立鹿流行性 出血病病毒 (EHDV)病原学检测方法 ，用纯化的抗 EHDV特异性单克隆抗体 包被ELISA板 ，用兔抗EHDVIgG作为夹心抗体，IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法，并 对该方法的特异性和敏感性进行 了试验。用 ELISA分别检测EHDV、蓝舌病病毒 (BTV)、水疱性 口炎病毒 (VSV)、赤羽病病毒 (AKV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)样品，用 RT—PCR作对照。结果表 明，ELISA具有 良 好的特异性和敏感性。用夹心ELISA和 RT—PCR同时检测 128份参考样 品，结果表 明夹心 ELISA 的特异 性和敏感性分别为 100 和 96．3 ，两种方法的符合率为 99．2 。本研 究结果为 EHDV检 测及鹿流行性 出血病流行病学调查提供 了有效的工具。 关键词：鹿流行性出病 ；鹿流行性 出病病毒 ；双抗体夹心ELISA；单克隆抗体 中国分类号：$854．43 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2011)10—0001—05 鹿流行性 出血病 (Epizootichemorrhagicdis— ELISA方法。通过对 EHDV 阳性样品、阴性样 品、 easeofdeer，EHD)是 由鹿 流行性 出血病 病毒 其他病毒阳性样 品及参考样 品的检测 ，结果表 明该 (EHDV)引起的，以引起 白尾鹿体温升高、黏膜和浆 ELISA方法具有良好的特异性和敏感性，该方法可 膜广泛 出血并常处于昏迷状态下死亡为特征的致死 以用于 EHDV快速检测。 性虫媒传染病 ，牛和羊也可以感染发病。流行期时， 1 材料与方法 此病危害较大，严重影响畜牧业和 国际贸易的发 1．1 材料 展L1]。由于 EHDV在周边国家 (如 日本 、朝鲜)都曾 1．1．1 病毒 、细胞株及实验动物 EHDV(血清 1 暴发过，存在 EHDV传人我 国的风险。因此，EHD 型8型)、蓝舌病病毒 (BTV)1、3、1O和 17血清型、 是我国进 出口贸易中需要监测的重要疫病 。 新泽西型水疱性 口炎病毒 (VSV-NJ)、赤羽病病毒 EHDV属呼肠病毒科 (Reoviridae)环状病毒 (AKV)、小反刍兽疫病毒 (PPRV)等灭活抗原 (经 属 (Obivirus)，是节肢动物源 (主要是库蠓)的双股 BHK一21细胞增殖)和 BHK一21细胞均 由深圳 出入 RNA病毒[2]。EHDV由 1O个片段 (1～10)组成 ，编 境检验检疫局动植物检验检疫技术中心动检实验室 码 7个结构蛋白(VP1-7)和 3个非结构蛋 白(NS1、 保存。3月龄新西兰家兔购 自广东省医学实验动物 NS2、NSa／NSaA)L3]。VP7蛋 白是 EHDV 的群特 中心。 异性抗原 ，由S7基因编码 ，基因全长 1162bp，编码 1．1．2 主要试剂、材料及试剂盒 HRP标记羊抗 349个氨基酸残基 ]。 兔 IgG为 Sigm