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《激光洪杂思志琦》等：提高mdrl基因体外转染骨髓造血细胞效率的实验研究
l1年第 32卷第5期 LASERJOURNAL(Vo1．32．No．5．2011) 73
提高mdrl基因体外转染骨髓造血细胞效率的实验研究
洪思琦 ，郭振华 ，王 佚
，1．重庆医科大学附属儿童医院：儿童发育疾病研 究省部共建教育部重点实验室，重庆
、2．重庆医科大学附属儿童医院普通外科，重庆 400014
提要：目的：探讨mdrl基因体外转染兔骨髓造血细胞的条件及转染后在细胞中的功能性表达。方法：秋水仙碱 (90ng／m1)筛选含人 mdrl
cDNA的产病毒包装细胞PA317一HaMDR1／A，制备浓缩病毒上清液并转染兔骨髓单个核细胞；分别用PCR法、免疫组织化学法和柔红霉素
(daunombieinDNR)~出试验检测mdrl基因的整合及功能性表达。结果：经秋水仙碱筛选后 ，产病毒包装糖蛋白(P—glycoproteinP一印)表达增
强；外源性mdrl基因能成功的导人兔骨髓造血细胞，转染 2日、4日的转染率分别为 22％、37％；转入的 mdrl基因能发挥药物外排泵的功能。
结论：采用浓缩病毒上清转染法能成功的将外源性mdrl基因导人兔骨髓造血细胞中并获得稳定的功能性表达，为进一步研究 mdrl基因转染
骨髓造血细胞后 自体回输在大剂量化疗中对骨髓保护作用的研究提供了依据。
关键词：多药耐药基因；转染；造血细胞
中图分类号：R394 文献标识码 ：A 文章编号：0253—2743(2011)05—0073—03
Research onimprovingtheefficiencyof缸．aIlsfel nghtemdrlgeneinto
bonemarrow hematopoieticcellsofrabbitinvitro
HONG Si—qi。GUO Zhen—hua1,2wWANGYi’
，1．KeyLaboratoryofDevelopmentalDist sinChildhoodChongqingandMinistry 、
lofEducation，Children’sHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400014，China； J
、2．De partmentofGeneral SurgeryIChildren’sHospitalofChongqingMdeicalUniversity，Chongqing400014，China／
Abstract：Objective：Toexploretheoptimaltransfectionconditionsinwhichtheforeignmdrlgeneistrnasferrde intohematopoieticcellsofrabbitbone
marrow，nadtesthteexpressionandfunctionofhtemdrlgeneinthecells．Me山ods：An amphotropicvirusproducercellline，PA317一HaMDR 1／A。which
containsafull—lengthcDNAofhunmnmdrlgene，wasa,A21eende withcolchicines(90ng／rd)，nadthesupernatnatwascollectednadconcentratde tococultivatde
w htebonenlarrow mononuclearcellsofhte rabbit．The integration。transfection rate and physiologicalfun ction ofmdrlgenewas testedbyPCR。SP
immunohistochemicalmehtodnadDNRextrusiontestrespectively．Results：Afterscreeningbyeolehieines，tIl
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