兔支气管败血性波氏杆菌fimN基因的原核表达.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis，2011，23(5)：890—893 http：／／www．~nyxb．cn 章春桃 ，刘燕，韦强，等．兔支气管败血性波氏杆菌tiatN基因的原核表达 [J]．浙江农业学报 ，2011，23(5)：890—893． 兔支气管败血性波 氏杆菌tiatn基因的原核表达 章春桃 一，刘 燕 ，韦 强 ，肖琛闻 ，鲍国连 ，，季权安 (浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华321004；2浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021) 摘 要：应用PCR方法扩增兔支气管波氏杆菌 (Bb)的菌毛蛋 白基因(fimN)，将fimN基因克隆到表达载体 pET-28a(+)中，获得重组质粒 pET28a-fimN。将此重组质粒转化受体菌 BL21后，用 IPTG进行诱导表达， SDS—PAGE结果显示表达蛋白分子量大小约为27kD，与理论预期值相符。用Western—blot试验分析纯化的表 达产物，结果表明，该重组蛋 白能与Rh阳性血清发生特异性反应。 关键词：波氏杆菌； ；表达；纯化 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1004—1524(2011)05—0890—40 ProkaryotieaexpressionofrabbitBordetellabronchisepticamajorfimbrialsubunitgenefimN ZHANGChun—tao，LIUYah，WEIQiang，XIAOChert—wen ，BAOGuo—liant，JIQua,,一an (CollegeofChemistryandLifeSciences，ZhejiangNormalUniversity，Jinhua321004，China； ofAnimal Husbandryand Veterinarian，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Hangzhou310021，China) Abstract：ThefulllengthoffimNfromBordetellabronchisepticainrabbitswasamplifiedwjthPCR。anditwas clonedintopET一28a(+)vector(namedpET28a-fimN)．TherecombinantplasmidwastransformedintoE．coliBL一 21cellsandinducedwithIPTG．TheresultsofSDS—PAGE showedthatthemolecularweightoftherecombinantpro— teinwasabout27kD．TheresultofWesternblotshowedthattherecombinationproteincouldberecognizedbythe specificantibodyagainstBb，indicatingthattheproteincouldbeusedasantigen． Keywords：Bordetellabronchiseptica；tiatn；expression；purification 兔文气管败血杆菌病(Bordetellabronchisepti— 病毒产生协 同作用，导致更为严重的呼吸道疾 ca，Bb)是由波氏杆菌引起的一种家兔呼吸道传 病 ’。波氏杆菌具有由．fimN基因编码的完整的 染病 ，于气候易变化的春秋两季多发，主要经 IV型菌毛合成系统。IV型菌毛有黏附作用，能使 呼吸道传播，病菌会随咳喷嚏、飞沫污染饲料、饮 细菌牢 固附着于动物消化道 、呼吸道 和泌尿生殖 水 、笼舍和空气，从而传染健康家兔 ，主要临床 道的黏膜上皮细胞上 ，是重要 的毒力 因子。。。另 症状表现为鼻炎型和支气管肺炎型。该病病程 外，研究表 明，波 氏杆菌定殖气管的能力 因菌毛 长，反复发作，经久难治愈，易造成患兔生长障 而得到加强，并可使细菌在机体 内得到持续定 碍 ，给养兔