增殖性溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合丝裂霉素对肝癌细胞的杀伤.pdfVIP

浙江理工大学学报，第26卷，第 1期，2009年 1月 JournalofZhejiangSci—TechUniversity Vo1．26，No．1，Jan．2009 文章编号：1673—3851(2009)01—0125～07 增殖性溶瘤腺病毒 ZD55．IL一24联合丝裂霉素对 肝癌细胞 的杀伤 仰 毅 ，王毅刚 ，仲苏阳 ，刘新垣l- (1．浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所，杭州310018； 2．中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海 200031) 摘 要：增殖性溶瘤腺病毒ZD55～IL_24是靶向p53缺失且携带肿瘤特异性的白细胞介素一24基因(IL-24)；丝裂 霉素 (mitomycinC，MMC)是一种 目前临床上癌症治疗常用化疗药物之一。研究联合应用ZD55一IL-24和MMC与单 独使用对肝癌细胞株的杀伤效应及机制。结果表明，ZD55一IL-24比携带对照基因EGFP的腺病毒ZD55一EGFP对肝 癌细胞具有更强的杀伤效果，而联合使用ZD55一IL_24与 MMC比单独使用对肝癌细胞具更好的治疗作用，而对正常 细胞的损伤仅来源于化疗药物 M 。此外，Hoechst33258染色和Westernblot实验证 明ZD55一IL厂24与 MM_C联合 处理诱导活化了肿瘤细胞的凋亡途径。以上结果显示肿瘤的传统疗法与新兴生物疗法相结合取得 了更佳效果，本 研究为临床肿瘤治疗提供理论和实验依据 。 关键词：增殖性溶瘤腺病毒；1[．-24基因；丝裂霉素(MMC)；肝癌 中图分类号：Q789 文献标识码 ：A 0 引 言 肝癌是一种恶性程度极高、预后极差的恶性肿瘤 ，具有 “癌中之王”之称 。肝癌病死率居于恶性肿瘤病死 率第二位，在中国每年大约有 1O万人左右死于肝癌。目前，对于肝癌的治疗主要采用手术治疗、放疗、化疗 等手段。丝裂霉素(mitomycinC，MMC)是治疗消化道肿瘤最常应用的化学药物之一，对肿瘤细胞晚G1期 及早 S期最敏感。一般认为其治疗作用是通过烷化基团和DNA双螺旋形成交联联结，破坏 DNA和RNA 的结构而杀灭肿瘤细胞。但鉴于化学药物对正常细胞具有杀伤作用以及肝癌存在着早期诊断难、转移率和 复发率高等问题，又使得化学治疗存在着靶向性差、具耐药性、易复发等许多不尽人意之处。随着生物和医 学技术的发展，肝癌的生物治疗方法逐渐显示出广阔的前景。靶 向溶瘤腺病毒治疗和基因治疗是肿瘤生物 疗法 中最为普遍的治疗方法 。1996年，Bischoff等[1首次报道去除EIB55KDa区的重组腺病毒 Onyx-015 能在P53异常的肿瘤细胞选择性复制引起肿瘤杀伤作用，腺病毒EIB55KDa蛋白是腺病毒早期基因编码的 蛋白，能够与细胞中的p53蛋 白结合，抑制其功能 ]。p53是宿主细胞抗腺病毒的主要蛋 白，正常细胞受腺 病毒感染后立即激活p53，诱导细胞凋亡L3]，腺病毒便不能再增殖，从而避免病毒扩散到临近组织。由于腺 病毒E1B55KDa蛋 白能够抑制p53的功能，大多数正常细胞感染腺病毒后并没有立即出现凋亡，腺病毒仍 然能够在正常细胞内复制，因此 EIB55KDa蛋 白是腺病毒在正常细胞中复制所必需的。然而，p53途径缺 收稿 日期：2OO8一O8—29 基金项 目：国家 自然科学基金 ，浙江省科技厅面上项 目(2o07C33o27) 作者简介：仰 毅(1982一 )，男，四川阆中人，硕士研究生，主要从事肿瘤靶向基因治疗研究。 浙 江 理 工 大 学 学 报 2009年 第 26卷 陷的肿瘤细胞 中，EIB55KDa蛋白则无处发挥这一功能而成为非必需口]。最近有新的报道称，EIB55KDa 蛋 白的功能与腺病毒晚期RNA核输出有关，缺失EIB55KDa蛋 白的腺病毒在正常细胞中由于RNA核输 出受阻而不能复制，但肿瘤细胞 由于遗传表型的改变导致 RNA核输出机制改变，从而使得在没有 E1B 55KDa蛋白的情况下病毒RNA也能正常输出[1。因此腺病毒缺失EIB55KDa基因后，不能在正常细胞中 复制而在p53失活的肿瘤细胞中大量复制、增殖，最终裂解肿瘤细胞，并释放子代病毒去感染临近的肿瘤细