筛选维甲酸样内分泌干扰物报告基因方法的建立.pdfVIP

· 468 · 环境与职业医学2009年 10月第26卷第5期 JEnvironOccupMed，Oct．2009Vo1．26N0．5 文章编号 ：1006—3617(2009)05．0468—03 中图分类号 ：R114 文献标志码 ：A 【论著 】 筛选维甲酸样内分泌干扰物报告基因方法的建立 陈刚，江俊康，丁绍红，王春，徐广飞，黄春妍，姚陈娟 摘要： [目的]建立应用荧光素酶报告基因筛检干扰维甲酸功能的环境化学物的方法。 [方法]利用基因重组 方法将3个重复序列RXR／RXR反应元件和2个重复序列RAR／RXR反应元件插入含荧光素酶报告基因的pGL4质粒上游， 再将该质粒转染表达维甲酸受体的MLE．12细胞，加入全反式维甲酸或雌二醇后，检测荧光素酶活性。 [结果]构建的 RARE．rATA．pGIA报告基因质粒经限制性内切酶和DNA测序证实构建成功。经报告基因试验证实，与阴性对照组相比， 维甲酸能使pGIA质粒的荧光素酶相对活性增加30．28倍，而雌二醇仅为 1．4倍 ，说明雌二醇没有干扰作用。 [结论 ] RARE．rATA．pGL4报告基因质粒可用于筛检环境 中维甲酸样干扰物。 关键词：内分泌干扰物；维 甲酸；报告基因试验 EstablishmentofReporterGeneAssayforScreeningRetinoicAcid-likeActivityofEndocrineDisruptors CHENGang，JIANGJun—kang，DINGShao—hong，WANGChun，XUGuang-fei，HUAN GChun-yan，YAO Cken-juan(SchoolofPublicHealth，NantongUniversity，Nantong，diangsu226007，Ch／na) Abstract： [Objective]ToconstructaRARE-TATA-pGL4luciferasereporterplasmidforscreeningendocrinedisruptors thatpotentiallybindstoRARsorRXRs．[Methods]AdoublestrandedoligonucleotidecontainingthreeRXR／RXRheterodimers andtwoRAR／RXRhomodimersresponseelementsandaTATAelementwasinsertedintopGL4lueiferasereporterplasmid．These constructsweretrnasfectedintoMLE-12cellsnadtreatedwihtall—trans—retinoieacidor17p-estradiol，thenthelueiferaseactivity wasmeasured．[Results]ThesequencingresultshowedthatRARE．TATA．pGL4plasmidwassuccessfullyconstructed．，I1h luciferaseactivityofRARE．TATA．Lucplasmidtreatedwithal1．trnas．retinoieacidor1713．estradiolresultedina30．28．f0ldand 1．4一foldincrease，respectively．[Conclusion]TheRARE-TATA-pGL4constructcanbeusedtoscreenretinoicacid-like endocrinedisruptors． KeyWords：endocrinedisruptors；retinoicacid；Iuciferasereporterassay 维甲酸是维生素A的氧化活性产物 ，在胚胎形成、发育 列为AGGTCA(N)1AGGTCA[。 以及细胞增殖 、分化过程中都起着重要作用[】，。胚胎期缺乏