表面固载的蛋白质对银纳米粒子的吸附及蛋白质固载的可视化检测.pdfVIP

中国科学 B 辑 :化学 2009 年 第 39 卷 第 1 期 : 82 ~ 86 SCIENCE IN CHINA PRESS 表面固载的蛋白质对银纳米粒子的吸附及蛋白质 固载的可视化检测 ① ② ② ①* 刘跃 , 凌剑 , 李原芳 , 黄承志 ① 西南大学药学院, 发光与实时分析教育部重点实验室, 重庆 400715; ② 西南大学化学化工学院, 发光与实时分析教育部重点实验室, 重庆 400715 * 通讯作者, E-mail: Chengzhi@ 收稿日期：2008-08-26; 接受日期：2008-12-03 摘要 银纳米粒子有强烈的等离子体共振散射特性,可作为光散射光谱探针用于 关键词 示踪和可视化分析. 通过研究固载于载玻片上的蛋白质对银纳米粒子的吸附, 发现 光散射 吸附在载玻片上的银纳米粒子在普通的白光发光二极管(LED) 照射下, 肉眼就能看 吸附机理 见其散射光. 据此建立可视化检测蛋白质在载玻片上最小完全固载量的方法. 最小完全固载量 可视化 两性生物大分子蛋白质在不同酸度条件下带有 在蛋白质检测方法上, 常用的银染法具有很高 不同的电荷, 与带相反电荷的基体能够发生吸附作 的灵敏度[13], 但同时其具有操作繁琐、污染会极大降 用. 而常规合成的金、银纳米粒子表面多包被有如柠 低其灵敏度等缺点[14]. 本文拟利用银纳米粒子的等 檬酸根等稳定剂, 所以在特定酸度的溶液中蛋白质 离子体光散射特性对其与蛋白质的吸附机理进行探 与金、银纳米粒子能够发生吸附. 基于两者的吸附作 讨, 并建立基于光散射信号的可视化分析检测蛋白 用, 闫海刚研究了血清白蛋白对银纳米粒子的包覆 质固载方法. 该研究方法通过银纳米粒子散射光的 作[1]; Jing等人利用表面增强拉曼散射(SERS)和密度 可见性对蛋白质在一定面积载玻片上的固载进行了 功能理论(DFT)研究了L-赖氨酸与金、银纳米粒子的 可视化检测研究, 实现了对蛋白质固载的快速、简便 吸附过程[2]. 但其吸附的有关参数及详细机理还需要 测定. 使用不同的手段加以探讨. 1 实验部分 共振光散射分析法只需要在普通荧光分光光度 计上测定光散射信号, 因而其操作简便并且灵敏度 1.1 试剂 [3] [4] [5] [6] 高 . 近年来已在蛋白质 、核酸 及核酸杂交 、药 1.0 mg/mL 人血清白蛋白(HAS, Sigma, 96.99%)、 物[7] 、染料[8] 等分析测试领域得到广泛应用. 金、银 牛血清白蛋白(BSA, 上海长阳生化制药厂, 电泳单 纳米粒子是理想的光散射光谱探针,可作为荧光类似 点纯) 、纤维素酶(Cellulase, 上海东风生化技术公司, 物应用于细胞生物学、免疫及DNA分析等[9]. 如金纳 生化纯) 、糜蛋白酶(Chymotrypsin, 北京格源天润生物 米材料修饰抗体用于癌细胞的散射成像诊断[10,11]和 技术有限公司, 医药级) 、刀豆蛋白 A(ConA, Sigma, 肿瘤的光热治疗[11]. 蒋治良等利用标记有抗体的银 生化纯) 、人免疫球蛋白 G(Human IgG, Sigma, ≥ 纳米粒子通过共振光散射法检测纤维蛋白原[12]. 95%)储备