血细胞等临时标本的制备观察、计数及血型的检测.docVIP

DNA指纹图谱实验 上课地点：生化楼上课时间：任课教师：办公地点：生化楼 电话：847063 课程要求： 预习掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤实验注意事项： 1、实验台要求摆放整齐； 2、； 3、实验纪律： 1、按时上课 2、穿实验服（白大衣） 3、不许吃东西，大声喧哗 4、手机静音 实验成绩： 预习报告： 20分 实验操作： 40分 报告内容：结果和讨论 40分 DNA指纹图谱实验 （指导教师：薛闯） 一．实验目的 1. 掌握 DNA 指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程 2. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定 DNA 片段的长度。 3. 掌握对DNA指纹数据进行基本统计分析方法。? 二 . DNA指纹图谱实验原理 1984 年英国莱斯特大学的遗传学家 Jefferys 及其合作者首次将分离的人源小卫星 DNA 用作基因探针，同人体核 DNA 的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，这种图纹极少有两个人完全相同，故称为 DNA指纹，意思是它同人的指纹一样是每个人所特有的。DNA指纹的图像在X光胶片中呈一系列条纹，很像商品上的条形码。由于 DNA 指纹图谱具有高度的变异性和稳定的遗传性，且仍按简单的孟德尔方式遗传，成为目前最具吸引力的遗传标记。 DNA 指纹具有下述特点：? 1. 高度的特异性：研究表明，两个随机个体具有相同 DNA 图形的概率仅3×10-11?；如果同时用两种探针进行比较，两个个体完全相同的概率小于 5×10?-19?。全世界人口约 50 亿，即 5×109?。因此，除非是同卵双生子女，否则几乎不可能有两个人的 DNA 指纹的图形完全相同。?2. 稳定的遗传性：DNA 是人的遗传物质，其特征是由父母遗传的。分析发现， DNA指纹图谱中几乎每一条带纹都能在其双亲之一的图谱中找到，这种带纹符合经典的孟德尔遗传规律，即双方的特征平均传递 50 % 给子代。?3. 体细胞稳定性：即同一个人的不同组织如血液、肌肉、毛发、精液等产生的 DNA 指纹图形完全一致。 DNA 指纹图谱法的基本操作： 从生物样品中提取 DNA （ DNA 一般都有部分的降解），可运用 PCR 技术扩增出高可变位点（如 VNTR 系统，串联重复的小卫星 DNA 等）或者完整的基因组 DNA ，然后将扩增出的 DNA 酶切成 DNA 片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星 DNA 探针与膜上具有互补碱基序列的 DNA 片段杂交，用放射自显影便可获得 DNA 指纹图谱。 DNA 指纹图谱法的基本操作示意图 琼脂糖凝胶电泳： 琼脂糖凝胶电泳是分离，鉴定和纯化DNA 片段的常规方法。利用低浓度的荧光嵌入染料-溴化乙锭进行染色，可确定DNA 在凝胶中的位置。如有必要，还可以从凝胶中回收DNA 条带，用于各种克隆操作。琼脂糖凝胶的分辨能力要比聚丙烯酰胺凝胶低，但其分离范围较广。用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为200bp至近50kbp 的DNA。长度100kb 或更大的DNA，可以通过电场方向呈周期性变化的脉冲电场凝胶电泳进行分离。 在基因工程的常规操作中，琼脂糖凝胶电泳应用最为广泛。它通常采用水平电泳装置，在强度和方向恒定的电场下进行电泳。DNA 分子在凝胶缓冲液（一般为碱性）中带负电荷，在电场中由负极向正极迁移。DNA分子迁移的速率受分子大小，构象。电场强度和方向，碱基组成，温度和嵌入染料等因素的影响。 DNA指纹数据处理： DNA指纹图谱的共有带率（Band-sharing，简称BS） BS=2NAB/(NA＋NB) 式中：NA指个体A的条带数，NB为个体B的条带数，NAB指个体A和个体B共有的条带数。 平均等位基因频率(q)及最低平均杂合率(Ht) q ＝l-(1-BS)1/2，Ht＝l-q 式中BS为共有带率。 两个个体具有完全相同的DNA 指纹图谱的概率（P） 两个无关个体具有完全相同的DNA 指纹图谱的概率为： P1 =（1-2BS＋2BS2 ）n/BS ； 两个同胞个体具有完全相同的DNA 指纹图谱的概率为： P2 =［1-0.5q（1-q）2（4-q）］n／BS 式中：n 为个体的平均条带数，q 为平均等位基因频率。 三 . 实验材料和试剂? DNA 样品：犯罪现场CS DNA 样品、嫌疑犯S1 DNA 样品、嫌疑犯S2 DNA 样品、嫌疑犯 S3 DNA 样品 2. 化学试剂和溶液 (1). TAE（ 50 ×） Tris?242g 冰醋酸 57.1ml ED