地衣芽孢杆菌发酵生产β-甘露聚糖酶的代谢通量分析.pdfVIP

第 7 卷第 6 期 过 程 工 程 学 报 Vol.7 No.6 2007 年 12 月 The Chinese Journal of Process Engineering Dec. 2007 地衣芽孢杆菌发酵生产β-甘露聚糖酶的代谢通量分析 刘朝辉， 齐 崴， 何志敏 (天津大学化工学院化学工程研究所，天津 300072) 摘 要：基于代谢通量分析理论研究了地衣芽孢杆菌生物合成β-甘露聚糖酶的胞内代谢活动. 首先构建了地衣芽孢杆 菌产β-甘露聚糖酶的代谢网络，并依据代谢物质量平衡原则建立了反应网络的代谢流模型；进一步采用线性规划的优 化方法分别以β-甘露聚糖酶合成反应通量最大和菌体生长速率最大为目标函数对模型进行求解，由此计算得到β-甘露 聚糖的最大理论转化率为 57.87%. 最后对代谢网络中的 5 个关键节点进行了比较分析，得到了 2 个类似非刚性的代谢 节点(5-磷酸核酮糖节点和草酰乙酸节点) ，为利用基因工程方法提高β-甘露聚糖酶的生产能力提供了理论依据. 关键词：地衣芽孢杆菌；β-甘露聚糖酶；代谢通量分析；线性规划 中图分类号：TQ814.4; TQ591 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2007)06−1163−06 质量守恒定律构建了代谢通量平衡模型，应用线性规划 1 前 言 方法对所建数学模型进行优化求解，并研究了该菌株胞 [1] 内代谢途径间的关系，重点探讨了影响β-甘露聚糖酶生 β-甘露聚糖酶(β-1,4-D-Mannanase, EC3.2.1.78) 是 物合成的重要代谢途径和关键节点的变化规律，为进一 一类能够水解β-1,4-糖苷键的半纤维素酶，其作用底物 葡萄甘露聚糖、甘露聚糖、半乳甘露聚糖及半乳葡萄甘 步提高地衣芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的生物合成能力 提供参考依据. 露聚糖等在自然界中分布较为广泛，多数属于可再生资 源. 作为半纤维素资源深加工的重要产品，β-甘露聚糖 2 地衣芽孢杆菌代谢网络及其模型的 酶已广泛应用于食品、医药、饲料、造纸、采油等诸多 建立 领域[2,3] ，尤其是β-甘露聚糖酶水解魔芋葡甘聚糖制得的 [4] [7] 甘露寡糖具有增殖双岐杆菌的生理功能 ，引起了食品 Çalìk 等 报道了他们建立的地衣芽孢杆菌代谢网 和医药界的广泛兴趣. 络，并分析了代谢途径对碱性蛋白酶、中性蛋白酶及α- 目前，关于微生物发酵制备β-甘露聚糖酶的研究报 淀粉酶合成的影响. 本工作在其基础上对地衣芽孢杆菌 道较多，但迄今从代谢工程角度研究β-甘露聚糖酶的发 的代谢网络进行改进，以分析β-甘露聚糖酶的合成，如 酵过程尚未见报道 . 代谢通量分析(Metabolic Flux 图 1 所示. 主要体现在：(1) 由于培养基中采用魔芋葡 Analysis, MFA)[5]是代谢工程研究的重要方法之一，它依 甘聚糖为主要碳源，进入胞内的还原糖除葡萄糖外还有 据胞内反应的化学计量学关系建立代谢流平衡模型，进 甘露糖；(2) 为了简化网络，减少了部分次要的中间代 而计算和分析代谢网络中所涉及的代谢流通量. 由胞内 谢物；(3) 菌体合成反应中氨基酸的系数采用有约 80%