Thermobifida fusca海藻糖合成酶的定点突变及其动力学性质研究.pdfVIP

维普资讯 镏嚏 J￡ G gAg． Bi。。i 20J0u7ne年，2600月7 文章编号 ：1008—3464 (2007)02一Ol15一O5 Thermobifidafusca海藻糖合成酶的定点突变及 其动力学性质研究 王青艳 ，陈发忠 ，黄福宝 ，韦传东 ，韦宇拓 ，黄 日波 (1广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁 530005 2南宁中诺生物工程有限责任公司，广西 南宁 530003) 摘要 ：对ThermoMfldafusca海藻糖合成酶 (TreS)保守区域 的氨基酸残基 1224、N242、Q333、E352和 N415进行定点突变 ，结果表 明：位点1224、N242、N415突变后酶的活力与野生型TreS相近 ，E352位点突 变后酶的比活力提高为野生型TreS的1．25倍。突变酶的最适温度、pH、K 和K 。没有明显变化；突变Q333R 则使TreS丧失了酶活力 。 关键词：Thermobifidafusca；海藻糖合成酶 ；定点突变 中图分类号 ：Q7S 文献标识码 ：A Studyonsite-directedmutagenesisandkineticsof trehalosesynthasefrom Thermobifidafusca WANG Qing—yan ，CHEN Fa—zhong。，HUANG Fu—bao。，WEIChuan—dong， W EIYu—tuo ，HU ANG Ri-bo (1 CollegeofLifeSciencesandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China； 2 NanningSinozymeBiotechnologyCoporationLimited，Nanning530003，China) Abstract：Fiveaminoacidresidues，I224，N242，Q333，E352andN415，withintheconserved regionofTreSfromThermobifida^5caweresubjectedtosite—directedmutagenesis，respectively．The resultsindicatedthattheTreSactivitiesofthemutantsderivedfrom positions1224，N242andN415 weresimilartothatofthewildtype．ThespecificactivityofthemutantE352R was1．25一foldofthe TreSofthewildtype．Theoptimum pH andtemperatureforactivity，K andK 。tofTreS ofthese mutantsdidnotsignificantlyalteredincomparisonwiththoseofTreSofthewildtype．However，the mutantQ333R showednoTreSactivity． Keywords：Thermobifidaf~,ca；trehalosesynthase；site—directedmutagenesis 海藻糖 (Trehalose)是由两个葡萄糖分子通过a，Q一1，1糖苷键连接而成 的非还原性二糖 ，广泛 存在于多种生物体内。越来越多的研究证实，无论是内源性的或外源性的海藻糖，都对逆境条件下 (如高温、高盐、干旱、重金属离子污染、冷冻和辐射等)的生物膜 、蛋白质及核酸等活性物质具有保 护作用 ¨。这些独特的生物学功能，使得海藻糖在食品、化妆品、医药和生物制品方面具有很大的应用 潜力 。．3]。 收稿 日期 2006—04—27； 修回 日期 ：2006—11—09。 基金项 目 国家973项 目 (2004CB719606)。 作者简介 王青艳 (1972一)，女 (tt族)，广西靖西人，工程师，