对肝癌细胞凋亡影响.pdfVIP

2012;32(3) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·341 · 基础研究 Rheb 和RhebD60K 突变基因重组慢病毒载体的构建、鉴定及其 对肝癌细胞凋亡的影响 1 2 2 2 1 2 陈可和 ，梁 博 ，邹镇洪 ，韩泽龙 ，潘金飞 ，刘安玲 1 2 广西壮族自治区人民医院临床肿瘤中心，广西 南宁 530021 ；南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室， 广东广州510515 摘要：目的构建携带Rheb 和RhebD60K 突变基因的重组慢病毒载体,并鉴定其在MCF-7 细胞中的表达效果，观察其对肝癌细 胞凋亡的影响。方法 PCR 法扩增Rheb 和RhebD60K 突变基因，构建重组质粒LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K ，脂质体法将 重组慢病毒载体和包装质粒混合物共转染HEK-293 FT 细胞，包装产生慢病毒颗粒。将病毒感染MCF-7 细胞后Western blotting 检测Rheb 及PS6 蛋白的表达；将病毒感染SK-HEP-1细胞饥饿处理后观察其凋亡情况。结果 PCR 及测序表明成功构 建了LV31-Rheb-WT、LV31-Rheb-D60K 重组慢病毒载体。Western blotting 结果显示慢病毒LV31-Rheb-WT 感染的MCF-7 细 胞内Rheb 下游的PS6 蛋白表达多于慢病毒LV31-Rheb-D60K 感染的MCF-7 细胞。显微镜下慢病毒LV31-Rheb-D60K 感染的 SK-HEP-1 细胞饥饿后凋亡数目多于慢病毒LV31-Rheb-WT 感染的SK-HEP-1 细胞。结论 本研究成功构建了Rheb 和 RhebD60K 突变基因重组慢病毒载体,初步观察到该突变基因重组慢病毒载体可诱导肝癌细胞凋亡，为进一步研究Rheb 基因在 肝癌发生发展中的作用，进而开展肝癌的临床靶向治疗研究奠定了基础。 关键词：Rheb ；慢病毒载体；MCF-7 细胞株；乳腺癌；SK-HEP-1细胞株；肝细胞癌 中图分类号：R735.7 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）03-0341-04 DOI: CNKI:44-1627/R1416.001 /kcms/detail/44.1627.R1416.001.html Construction of recombinant lentiviral vectors containing Rheb gene and its mutant RhebD60K gene and their expression in human liver cancer cells 1 2 2 2 1 2 CHEN Kehe , LIANG Bo , ZOU Zhenhong , HAN Zelong , PAN Jinfei , LIU Anling 1Clinical Oncology Center, Peoples Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, China; 2Department of Cell Biology, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To construct recombinant lentiviral vectors carrying Rheb gene and its mutant RhebD60K gene, and examine their expression in human liver cancer cells. Met