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土壤环境PAHs消减的根际作用 马斌，何艳，徐建明 浙江大学环境与资源学院 1．前言 因“三致”效应和环境毒性，多环芳烃(PAHs)在土壤中的污染对陆地和湿地生态系统具 有极高风险。为了修复受PAHs污染的土壤，目前已分离得到大量PAHs降解微生物，但这种 通过实验室培养获得的菌种很难在田间尺度上批量的修复运用。近年来，作为一种高效率、 低风险、低价格和低扰动的原位修复技术，植物根际修复在PAHs污染_七壤中的优势修复作朋 逐渐被证实，目前备受关注。 为了进一步探明植物根际在土壤环境中PAHs消减方面的重要作用，我们基于整合分析方 法系统分析了不同植物根际PAHs消减效率及规律，发现植物根际能够有效促进土壤中PAHs 的消减，且植物根际对十壤中PAHs消减效应不受队Hs污染类型(复合或单一)的影响。整 合分析的结果还表明，在植物根际，PAHs降解微生物的数量也明显较高。此外，根据对实验 室外源添加队Hs的污染土壤与污染位点原位采集的污染十壤的对比试验，我们发现，植物的 根际效应在新鲜污染土壤与老化污染土壤之间存在着显著著异。因此，鉴于目前进行土壤PAHs 消减根际作用的研究大多通过实验室外源PAHs添加展开，对于深入认识植物对PAHs消减根 际作用的实际潜力存在一定的限制，本文特别选择了长期PAHs污染区域生长的植物为对象， 研究了其对PAHs消减的根际作用，解析了其中PAHs的降解细菌群落，并分离纯化得到了 PAHs降解细菌，旨在为发展和优化植物原位修复技术提供理论支撑。 2．材料与方法 采用抖落法采集了无锡某铸造厂周边PAHs污染区域植物根际和1F根际土壤，测定其PAHs 含量，并通过富集培养和分离纯化得到PAHs降解细菌，测定其对芘的降解能力，并采用DGGE 的方法研究了土壤中和富集培养的细菌群落结构。十壤PAHs含量采用EPA3360方法提取， EPA3650方法纯化，EPA8270方法测定。选用矿物培养基添加菲、芘、苯并芘作为碳源进行 富集培养，分别接种根际和北根际土壤，每周更换一次培养基。培养8周后，用涂布菲、芘、 苯并芘的M8培养基划线纯化细菌，根据细菌形态共筛选出数种PAHs降解细菌。 sPIN 采用F髂tDNAkit(MPBIO)提取土壤和富集培养基中的DNA，细菌基因组DNA提 10min，94oC30s，53oC30s，72oC60s， DNA的V3区域，循环条件为950C gene)扩增16s 后，用Bio-md 下130V电泳330ITlin。 et 采用Vilaa1．(2001)的方法测定细菌对芘的降解能力。向添加200mg·K一芘的矿物培 养基中接种细菌(oD600=1)，培养两周，每两天取一次培养基测定芘含量。用Lo、删法测定 26 培养基胞外蛋白含量。 3．结果与讨论 3卜}：壤PAHs音量 比较不同植物根际和1E根际十壤16种P^Hs含昔发现，各种植物根际PAHs含帚均低下 非根际土壤，但是不同植物根际PAHs的消减率存在较大差异，其中蚕豆、大豆和小麦根际与 80n90。 1|根际土壤PAHs的比值为065，而玉米、燕麦帛l油菜的相麻比值为O 32细菌群落结构变化 以蚕豆为例，其根际土壤和非根际土壤细菌群落结构有很大差异，优势菌种明显不同， 根际l壤的细菌多样性显并高r1#根际i壤．而富集菌群群落结构几乎没有著异。对丁同一 竹点的十壤，无论接种怕细茁群落结杜』如何，在相尉的PAHs胁迫r，常集得到的细茼群落却 是相同的。在进一步的分离纯化中，得到了许多枉富集茵群中并不，一优势的降解细菌。 目l蚕Ⅱ根R与非根际士壤亩集PA¨s降解苗群 图2一种芘降解细苗在培养基巾对芘 DccE☆跛幽带．Rl—R3-非根％十培寓集苗群： 的利用盈№外蛋自古量．o一接种sbean RtRt根目土埋富集苗群 sp2；‘来接苗对m：△-来徭m芘对麒：×一§自含i 33细菌降解能力 测定了几种细菌对芘的降解能力，结果表明这儿种细菌的降解能力有一定差异。幽2中 so蛐sp2在12天时唰山的