香鱼IL-12B 基因序列及其表达与鳗利斯顿氏菌感染的相关性分析.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(9): 1314– 1320 DOI: 10.11844/cj cb.2013.09.0145 香鱼IL-12B基因序列及其表达与鳗利斯顿氏菌 感染的相关性分析 * 沈广强 陈 炯 史雨红 周前进 陆新江 (宁波大学生物与海洋科学系, 宁波3152 11) 摘要 白介素-12B(interleukin-12B, IL-12B)是组成IL-12分子的亚基, 参与病原菌感染引起的 免疫反应。该研究经香鱼(Plecoglossus altivelis) 巨噬细胞转录组测序获得其IL-12B基因, 包括完整 的开放阅读框在内, 序列大小为1 152 bp, 预测编码的前体蛋白由303个氨基酸组成, N-端22个氨基 酸残基为信号肽序列。序列比对及进化树分析表明, 香鱼IL-12B与大西洋鲑IL-12B进化关系最近, 氨基酸序列同源性达50%。香鱼IL-12B基因mRNA在健康香鱼头肾组织和外周血白细胞中表达量 最高, 在脾脏、腮和肠等组织也有少量表达。荧光定量PCR分析揭示, 鳗利斯顿氏菌(Listonella an- guillarum)感染后, 香鱼头肾组织和外周血白细胞IL-12B基因mRNA表达显著上调, 12 hpi(hours post infection)时达到峰值。随后原核表达了香鱼IL-12B, 并制备抗血清。Western blot结果揭示, 香鱼血 清IL-12B含量在鳗利斯顿氏菌感染后4 hpi时尚无显著变化, 8 hpi后显著上调, 并表现持续增加。综 上, 香鱼IL-12B基因的表达变化与鳗利斯顿氏菌感染过程密切相关, 揭示香鱼IL-12B基因可能在病 原菌感染引起的免疫反应中发挥重要作用。 关键词 白介素-12B; 香鱼; 鳗利斯顿氏菌; 基因表达 Sequence Analysis of Sweetfish (Plecoglossus altivelis) Interleukin-12B Gene and Its Expression Changes upon Listonella anguillarum Infection Shen Guangqiang, Chen Jiong*, Shi Yuhong, Zhou Qianjin, Lu Xinjiang (Faculty of Life and Marine Sciences, Ningbo University, Ningbo 315211, China) Abstract Interleukin-12B (IL-12B), a subunit of IL-12, plays an important role in the inflammatory re- sponse in mammals against intracellular pathogenic bacteria. In this study, the cDNA sequence encoding IL-12B gene of sweetfish, 1 152 bp in length excluding 3′-poly A tail, was obtained from de-novo transcriptome sequencing of sweetfish macrophages. The sequence contained a complete open reading frame (ORF), which encoded a propep- tide of 303 amino acids (aa). A 22 aa signal peptide was predicted to be existed at its N-terminus. Sequence analysis showed that sweetf