产生物膜菌株的分离鉴定及其产膜特性分析.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１１）：３８４３ 产生物膜菌株的分离鉴定及其产膜特性分析 １，２ ２ ２ ２ ２ １ 李龙杰 　周　刚 　施庆珊 　欧阳友生 　陈仪本 　胡文锋 （１华南农业大学食品学院　广州　５１０６４２　２广东省微生物研究所 省部共建华南应用微生物国家重点实验室　广州　５１００７０） 摘要　目的：在含异噻唑啉酮类杀菌剂的腐败变质样品中分离筛选能够产细菌生物膜的菌株，并 对其产膜特性进行初步研究。方法：采用平板划线法分离纯化菌株；采用微孔板结晶紫染色法筛 选产生物膜菌株；通过生理生化特征和 １６ＳｒＤＮＡ分子进化分析鉴定菌株种属；运用激光共聚焦 电子显微镜观察分离得到的菌株在玻璃片表面形成生物膜情况，包括胞外多糖及生物膜内部活、 死细菌分布；最后再次采用微孔板结晶紫染色法研究培养时间、ｐＨ值和不同碳源对该菌产生物膜 的影响。结果：分离筛选出一株产生物膜菌株 ＢＦ１７，并且该菌株被鉴定为阴沟肠杆菌 （Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ）；ＢＦ１７分别在９６ｈ和ｐＨ为５时产生物膜量最高；静置培养４ｄ后，ＢＦ１７ 在玻璃片表面能产生典型的生物膜形态和结构；同时该菌株利用 乳糖和Ｄ果糖产生物膜能力 α 最高，而利用柠檬酸产生物膜能力最低。结论：菌株ＢＦ１７产生物膜能力稳定，可以作为生物膜深 入研究的材料；同时，ＢＦ１７的产膜能力易受外界环境条件的影响。 关键词　阴沟肠杆菌　生物膜　产膜特性 中图分类号　Ｑ８１５ 　　细菌生物膜（ｂｉｏｆｉｌｍ，ＢＦ）是指由附着于生物或者 　　本实验室前期已经从含杀菌剂的工业腐败变质样 非生物实体表面的细菌细胞和包裹着细菌的水合性基 品中分离得到一批细菌菌株，但对其生理生化特性没 ［１］ 有研究，因此，本文首先利用结晶紫染色法从上述菌株 质所组成的结构性细菌群落 ，生物膜的形成和发展 给医学、食品、工业等领域造成重大影响和损失。随着 中筛选产生物膜的菌株，对其产膜过程和特性进行初 含有抗菌防腐剂的各种产品包括日化用品和食品等逐 步研究，研究结果将对生物膜的正确和高效治理提供 渐开发和上市，因生物膜的形成而引起的防霉防腐体 指导。 系失效也逐渐被发现、认识和研究，并取得了一定的 １　材料与方法 成果。 　　细菌生物膜的形成包括细菌与附着载体材料表面 １．１　材　料 和细菌与细菌之间的相互作用，这种作用会决定并影 １．１．１　样品来源　广东佛山南庄华星粘胶厂腐败变 响成熟生物膜的结构、功能和组成；同时，生物膜的形 质的淀粉水样品（曾使用异噻唑啉酮类药物作为防腐 成是一个动态过程，主要包括以下四个阶段：粘附定 剂）。 植阶段、发展阶段、成熟阶段和细菌的脱落与再植阶 １．１．２　培养基　胰蛋白胨大豆琼脂培养基（ＴＳＡ）：胰 ［２］ 蛋白胨 １５ｇ／Ｌ，大豆蛋白胨 ５ｇ／Ｌ，氯化钠５ｇ／Ｌ，琼 段 ，以上四个阶段均可被外界的物理、化学或生物因 ［３］ 脂 １５ｇ／Ｌ，ｐＨ为７．３±０．２；Ｍ９培养基：葡萄糖 ２０ 素影响 ，这些因素主要包括营养条件、金属离子浓 ［４］ ［５］ ｇ／Ｌ，ＮａＨＰＯ １７．１ｇ／Ｌ，ＫＨＰＯ５ｇ／Ｌ，ＮＨＣｌ１０ｇ／ 度 、ｐＨ值、温度 等。 ２ ４ ２ ４ ４