靶向Cdc6 RNA干扰抑制舌癌Tca8113细胞增殖的研究.pdf

中山大学博士论文 靶向Cdc6 RNA干扰抑制舌癌Tca8113细胞增殖的研究 靶向Cdc6RNA干扰抑制舌癌 Tca8113细胞增殖的研究 博士研究生： 冯崇锦 博士生导师： 廖贵清教授 专 业： 口腔临床医学 中文摘要 舌鳞状细胞癌(简称舌癌)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，约占43．4％。 传统的手术、放疗、化疗及其综合治疗对早期舌癌可获得良好的疗效，但对晚期 或复发的患者疗效欠佳，其总的五年生存率不足60％。因此，有必要寻找新的诊 断及治疗方法，以期提高舌癌患者的生存率和生存质量。 随着医学的不断发展，人们认识到恶性肿瘤实质上是一种基因疾病，其发牛、 发展涉及多种基因水平的改变，导致正常细胞原癌基因和抑癌基因功能改变、细 胞信号传导受阻，细胞周期紊乱、细胞凋亡受到抑制等，结果出现细胞的异常增 殖。从基因水平研究舌癌的发病机理将促使我们对其做出更准确的诊断和预后评 价，发现更新的治疗和预防方法。 DNA复制与癌症的发牛、发展有密切的关系。虽然癌症的诱因各有不同， 但最终必定要通过激活DNA复制起始复合物使DNA不断复制，癌细胞才能不 断分裂增殖。DNA复制起始蛋白是构成DNA复制起始复合物的重要组成部份， 因此抑制DNA复制起始蛋白或其调控因子将会阻止癌细胞的增殖。DNA复制起 始蛋白有望成为癌症发生发展检测和基因治疗的理想标靶。 较多的与人的恶性肿瘤关系最密切的两种DNA复制起始蛋白。Cdc6和Mcms 都是真核生物DNA复制调控的重要因子，参与构成DNA复制前复合物。Cdc6 的主要功能是在Gl期向S期过渡中调节DNA复制的起始。真核生物细胞的Cdc6 谢酶，具有促进ATP结合与水解的作用。这是人类染色体复制及通过S期所必 一T一 中山大学博}：论文 靶向Cdc6RNA干扰抑制舌癌Tcagl13细胞增殖的研究 由S期向M期的进程，防止细胞在S期尚未完成DNA复制之前就进入有丝分 裂M期。因此Cdc6是DNA复制和细胞增殖所必需的蛋白。Mcms蛋自家族有 六个成员(Mcm2．7)，具解链酶的活性，同时在DNA复制的起始和延伸两个阶 段起作用。 稳定的蛋白质，半衰期短，其含量在细胞周期中是波动变化的，而Mcms蛋白却 保持相对恒定。 Cdc6和Mcms主要在增殖活跃的细胞中表达，当细胞进入Go期和分化、衰 老时不表达。这一特性在病理学诊断和鉴别诊断中具有重要意义并已应用于临 床。 有研究表明，在宫颈癌、甲状腺癌、肺癌及脑肿瘤组织中存在高表达的Cdc6 的表达水平可作为口腔鳞癌患者预后判断的一种方法。另外有研究指出，通过抑 制Cdc6和Mcms等多种DNA复制起始蛋白的表达可选择性阻止肿瘤细胞的增殖， 提示选择性抑制DNA复制起始蛋自的表达，有可能成为一种崭新而又有效的癌症 治疗模式。 RNA干扰技术是近年来发现的一种新的诱导基因沉默的技术。当外源性或内 合，在酶的作用下特异性降解mRNA，从而干扰相应基因表达，导致基因沉默。 RNAi效应具有高特异性、高稳定性、高效性，已成为肿瘤基因治疗研究的重要 工具，并已广泛应用于口腔颌面部肿瘤基因治疗的研究。 基因治疗的关键是基因转移，即将外源基因(目的基因)特异转移至靶细胞 并使之表达。目前进行基因转移的方法分为病毒载体系统和非病毒载体系统。非 病毒载体系统(如显微注射、电穿孔、基因枪、脂质体介导等)的局限性是转移 的效率太低，而病毒载体系统则克服了这个不足。最常用的病毒载体有慢病毒、 逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒载体。其中以HIV．1为基础构建的慢病毒载体 克服了逆转录病毒只能感染分裂期细胞的特点，同时又较腺病毒载体的免疫反应 中山大学博十论文 靶向Cdc6RNA干扰抑制舌癌Tca8113细胞增殖的研究 小，因而成为目前研究最多、最理想的基因转移载体之一。 目前尚未见有关DNA复制起始蛋白Cde6和Mcms在舌癌研究方面的报道， ll 病变组织及舌癌Tca8 3细胞