奥尼罗非鱼无乳链球菌的鉴定、致病性及药物敏感性研究.pdfVIP

第29卷 第 6期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．29 No．6 2010年 12月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Dec．2010，745~ 751 奥尼罗非鱼无乳链球菌的鉴定 、 致病性及药物敏感性研究 谭 晶晶 陈昌福一 高 宇 刘振兴 王美珍 李革雷 华 中农业大学水产学院，武汉 430070 摘要 从海南省某水产养殖场患病奥尼罗非鱼 (Oreochromisauyeus×Oreochromisniloticus)中，分离到 1个编号为LFY-08—23的菌株。经过对分离菌株进行生理生化特性鉴定、Biolog系统鉴定以及利用原核生物 16SrRNA基因通用引物进行 16SrRNA基 因的克隆及序列分析，结果发现 LFY-0823菌株与无乳链球菌 (Streptococcusagalactiae)的生理生化特性相似，16SrRNA基 因克隆及序列分析结果与 S．agaIactiae (EF092913，DQ303183，AF459432)自然构成一个分支，相似性高达 99．8 。用分离的S．agalactiaeLFY_O8—23 菌株对异育银鲫和斑点叉尾触进行人工感染试验，结果表明，当注射菌浓度达到 1．0×10。cfu／mL时，2种鱼全 部死亡。S．agalactiaeLFY-08—23菌株对头孢氨噻肟、丙氟哌酸、利福平等 13种药物高度敏感，对呋喃妥因、新 生霉素、强力霉素等7种药物中度敏感 ，对卡那霉素、链霉素、磺胺异恶唑等 5种药物不敏感。 关键词 奥尼罗非鱼 ；无乳链球菌；鉴定；系统发育分析 ；人工感染 ；药物敏感 中图分类号 R378．12 文献标识码 A 文章编号 1000—2421(2010)06—074507 近年来 ，随着罗非鱼养殖规模逐渐扩大，各种传 18T载体、DNAMarkerDI2000、无DNase／RNase 染性疾病的发生与危害也呈现上升的趋势，尤其是 水购 自大连宝生物 (TaKaRa)公 司；胶 回收试剂 链球菌病 (Streptoc。ccosis)的大范围流行，对罗非 盒、DH5a感受态细胞购 自北京原平皓公司；引物 鱼的养殖造成了严重威胁_l1]。迄今为止的研究结 fD1(5-AGA GTT TGA TCM TGG CTCA 3)， 果证明，导致罗非鱼链球菌病的病原菌有所不同，但 rD1(5～TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T- 是 ，主要致病菌是无乳链球菌 (Streptococcusaga— 3)由上海生工生物工程技术服务有限公司测序部 lactiae)和海豚链球菌(S．iniae)，2种致病菌所致疾 合成；微量鉴定管、药敏纸片购 自杭州微生物有限公 病 的共 同症状是病鱼出现败血症、脑脊膜炎等，并且 司。 根据菌落、菌体形态很难辨别这 2种致病菌u3]。笔 1．2 病鱼来源及症状观察 者采取菌体形态观察、生理生化鉴定及 16SrRNA 海南省琼海市某水产养殖场饲养的奥尼罗非鱼 基因序列分析等方法，从患病奥尼罗非鱼 (Oreo— 成鱼出现大批死亡 。取该渔场发病鱼塘里濒死的奥 chromisaureus×Oreochromisniloticus)中分离 、鉴 尼罗非鱼观察并记录其症状，剖检典型病鱼记录其 定 了无乳链球菌 (S．agalactiae)，并对分离 的菌株 内脏病理变化 。 进行了人工感染和药敏试验 ，旨在