NF-κB报告基因重组腺病毒的构建及活性分析.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vo1．44 No．6 Dec．2012 · 技 术 方 法 · NF—KB报告基因重组腺病毒的构建及活性分析 郭金海 ， ，王 峰 ，王平章 ，赵 丽 ，石太平 ，陈英玉 ’ (1．北京大学基础医学院免疫学系，卫生部医学免疫重点实验室，北京 100191；2．国家人类基因组北方研究中 心 ，北京 100176；3．北京大学人类疾病基因研究中心 ，北京 100191) [摘 要]目的：探讨基于腺病毒载体的核因子 KB(nuclearfactor—KB，NF-KB)报告基因系统作为NF-KB上游调控信 号分子筛选模型的可行性。方法：利用5型El／E3缺陷型腺病毒载体pAdxsi构建NF-KB报告基因的重组腺病毒， 并利用该腺病毒感染多种贴壁细胞和悬浮细胞进行NF-KB报告基因的活性分析。结果：成功构建了NF-KB报告 基因重组腺病毒Ad—NF．KB—luc，其能够感染 HepG2、MGC803、THP一1、U937等细胞，肿瘤坏死因子ot(tumornecrosis factor．o，【TNF．仅)或脂多糖 (1ipopolysaccharide，LPS)刺激显示重组腺病毒携带的NF-KB报告基因具有活性。结论： 以腺病毒Ad—NF．KB-luc作为NF-KB报告基因的转移载体 ，不仅可以感染常规方法难以转染的细胞系 ，而且产生的 报告基因活性稳定可靠，拓展了^—tcB报告基因的应用范畴。 [关键词]NF-xB；腺病毒；基因，报告 ；萤光素酶类 【中图分类号]R34 【文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2012)06-0954-06 doi：10．3969／j．issn．1671-167X．2012．06．031 ConstrucnonofrecombinantNF-KB reporteradenovirusandactivityanalysis GUOJin-hai’ ，WANGFeng2，WANGPing—zhang2，ZHAOLi，SHITai-ping2，CHENYing—yu’ (1．KeyLaboratoryofMedicalImmunology，MinistryofHealth；PekingUniversitySchoolofBasicMedicalSciences，Bei— jing100191，China；2．ChineseNationalHumanGenomeCenter，Bering100176，China；3．PekingUniversityCenterfor HumanDiseaseGenomics，Beijing100191，China) ABSTRACT Objecfive：Tostudythefeasibilityofadenovirus．basednuclearfactorKB (Ⅳ ．KB)reporter asamodeltoscreentheupstream signalregulatorsofJⅦ一KB．Methods：Atype5(El／E3deficient) adenovirusvectorpAdxsiwasusedtoconstructtheNF．KB reporteradenovirus．Multipleadherentand suspendingcelllineswereinfectedbytheNF．KB reporteradenoviurs．andtheluciferaseactivityofthe KBreportergenewasmeasured．Results：AnNF．KBreporteradenovirus(Ad—NF．KB．1uc)wassuc． cessfullyconsturcted．TheviurswascapableofinfectingHepG2．MGC803．THP一1andU937celllines andshowedhighactivitiesofNF．KB—lucreportergenewhenstimulatedbytumornecrosisfactor一仅 (TNF— ot)orlip0polysaccharide(LPS)