成年大脑神经细胞特异性ADAM10基因敲除小鼠模型的建立与鉴定.pdfVIP

遗 HEREDITAS(Beijing)2012年12月 ISSN0253-9772 WWW．chinagene．cn 研究报告 DoI：10．3724／SP．J．1005．2012．01570 成年大脑神经细胞特异性ADAM10基因敲除小鼠模型 的建立与鉴定 刘军，周常文，韦秋兰，庄建龙，林熠华，郑杰辉 福建医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学系，细胞与发育工程研究中心，干细胞工程与再生医学福建省高校重点实验室， 福州 350004 摘要：去整合素和金属蛋白酶 10(ADAMIO)是一种能够水解 30余种跨膜蛋白质的 “脱落酶”(sheddase)，参与 诸多生理过程和致病机制，如胚胎发育、细胞粘附、信号转导、免疫反应 、癌症和阿尔茨海默病。迄今，已报 道的ADAMIO完全基因敲除小鼠和大脑神经前体细胞特异性ADAMIO基因敲除小鼠分别于胚胎期或围产期死 亡，致使无法研究成年小鼠大脑神经细胞ADAMIO基因的功能。文章利用本研究小组建立的CaMKIIa—Cre转基 因小鼠与 删 D M 转基因小鼠杂交，获得了 CaMKIIaCre／ADAM10 小鼠，并对其进行鉴定。利用 PCR方法检测成年ADAMIOcKO小鼠大脑基因组DNA表明，ADAMIO基因缺失主要发生在前脑皮层和海马中。 荧光定量PCR检测结果显示，ADAMIOmRNA的表达水平在前脑皮层和海马中分别降低 55．7％和 60．8％；使用 Westernblotting方法研究发现，ADAMIO成熟蛋白质的含量在前脑皮层和海马中分别减少63％和84．8％ 。采用 免疫组织化学方法检测表 明，成年 ADAMIOcKO小鼠与野生型小鼠相 比，其大脑皮层和海马神经细胞的 ADAM10免疫染色明显减弱，而其它细胞如胶质细胞的免疫染色基本一致。总之，文章成功制备了首个存活至 成年的大脑神经细胞特异性ADAMIO基因敲除(cKO)／J,鼠，克服了小鼠因ADAMIO缺失在胚胎期或围产期死亡 的弊端，为研究成年小鼠大脑神经细胞ADAMIO基因的功能奠定了坚实的基础。 关键词：ADAMIO；条件性基因敲除；转基因小鼠；Westernblotting；免疫组化实验 Generation and characterization of the adult neuron—specific ADAM l0knock．outmice LIU Jun，ZHOU Chang—Weln，WEIQiu—Lan，ZHUANG Jian—Long，LIN Zhao-Hua， ZHENG Jie．HUi DepartmentofCellBiologyandGenetics，SchoolofBasicMedicine／CenterofCellandDevelopmentalBioloyg ／ProvincialKeyLabora— toryofStemCellandRegenerativeMedicine，FujianMedicalUniversity，Fuzhou350004，China 收稿 日期：2012—03—26；修 回日期：2012—05—03 基金项 目：福建省 自然科学基金项 目(编号：201OjO1171)和福建医科大学科研发展基金项 目(编号：XZ04005)资助 作者简介：刘军，硕士研究生，专业方向：遗传学。E．mail：290178077@qq．corn 通讯作者：周常文，教授，硕士生导师，研究方 向：功能基因组学。E．mail：zhouchangwen624@sina．coitl 致 谢：福建医科大学江一平教授和朱元贵老师在实验过程中给予了大量帮助，在此表示诚挚的感谢 ! 网络出版时间：2012／8／9 10：45：07 URL：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／11．1913．R1045．002．html 第 12期 刘军等：成年大脑神经细胞特异性ADAMIO基因敲除小鼠模型的建立与鉴定 1571 Abstract：Adisintegrinandmetalloproteinase10 D)isamajorsheddaseforover30differentmembranepro． teinsandgetsinvolvedinsuchphysiologicalprocessesandpathogenesisasembryonic