高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的克隆及序列分析.pdfVIP

第 34卷 第 6期 中 国 草 地 学 报 2012年 11月 VoI_34 NO．6 ChineseJourna1ofGrassland NOV．2O12 文章编号：1673—5021(2012)06—0075—06 高丹草超低氢氰酸含量 ISSR特征片段的克隆及序列分析 周亚星 ，于 肖夏。，于 卓 ，李造哲 (1．内蒙古农业大学农学院，内蒙古 呼和浩特 010019；2．内蒙古民族大学农学院，内蒙古 通辽 028043；3．中国农业 大学农业部作物遗传改良重点实验室，北京 100193；4．内蒙古农业大学生态环境学院，内蒙古 呼和浩特 010019) 摘要 ：为明确高丹草超低氢氰酸含量 ISSR特征片段的DNA分子特征，以散穗高粱 ×黑壳苏丹草杂种 F 的3 个超低氢氰酸含量 ISSR特征片段 H一1、H一2、H一3和散穗高梁 ×白壳苏丹草杂种 F。的3个超低氢氰酸含量 ISSR特 征片段 B一1、B一2、B一3为材料 ，对 6个不同的ISSR特征片段进行 了克隆和测序分析 。结果表明：克隆的特征片段 H一1 序列全长为 1377bp，序列包含 1个 357bp的完整编码 区(ORF)，位于 743～1099bp区域 ，共编码 119个氨基酸 ，片段 与小麦亚种蛋 白b的同源性为 6O 片段 H一2序列全长 2268bp，序列包含 1个 279bp的ORF，位于 735～1013bp 区域 ，共编码 93个氨基酸 ，片段与高梁假设蛋 白SORBIDRAFT 05g027190同源性为 63．9 ，与水稻粳稻组假设蛋 一 白OsJ 一 07776同源性为 62 。片段 H一3序列全长 2614bp，序列包含 1个 339bp的ORF，位于 1024～1362bp区域 ， 共编码 113个氨基酸 。片段 B-1序列全长 1432bp，序列包含 1个 3OObp的ORF，位于 700～999bp区域 ，共编码 100 个氨基酸。片段B一2序列全长 1363bp，序列包含 1个 228bp的ORF，位于 603～830bp区域，共编码 76个氨基酸。 片段 B一3序列全长 2751bp，序列包含 1个 186bp的ORF，位于 2534--2719bp区域 ，共编码 62个氨基酸。片段 H一3、 B1、B-2、B-3与现有已知的植物碱基序列和氨基酸序列没有同源性 ，可能是与高丹草超低氢氰酸含量关系更为密切 的DNA新序列 。 关键词 ：高丹草 ；超低氢氰酸含量 ；ISSR特征 DNA片段 ；克隆；测序 中图分类号 ：$544 文献标识码 ：A 高粱[Sorghumbicolor(I．)Moench]与苏丹草 Aw67772、AW67771)，并将其用 于 PCR—ISSR扩 [Sorghumsudanense(Piper)Stapf]种间杂交产生 增 ，通过对扩增的超低氢氰酸和高氢氰酸含量的 4 的后代常称为高丹草 ，它结合了高粱鲜草产量高、抗 个杂交组合 的 ISSR标记差异片段进行 比对，得到 逆性强和苏丹草叶量大 、品质好等优 良特性 ，杂种优 与超低氢氰酸含量相关 的 ISSR特征片段 (分子标 势强 ，饲用价值高 【 】。高丹草 的不足之处是鲜草 记)11个 ]。其 中，散穗高粱 ×黑壳苏丹草杂交组 中含有氢氰酸 ，家畜采食量大时会 出现中毒现象 ]。 合 3个特征片段 的长度为 900bp、1600bp、14OObp， 选育青刈饲喂家畜安全的超低氢氰酸含量 (株高约 分别命名为 H一1、H一2、H一3，所用引物为 AW75511； 100cm时茎叶鲜草氢氰酸含量 1～15mg／kg，青刈后可 散穗高粱x白壳苏丹草