片烟黑曲霉菌株产纤维素酶的条件优化及酶的分离纯化.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgriculturaeZhefiangensis，2012，24(6)：1122—1128 http：／／www．zjnyxb．cn 范坚强，周彬，宋纪真 ，等 ．片烟黑曲霉菌株产纤维素酶的条件优化及酶的分离纯化[J]．浙江农业学报 ，2012，24(6)： l122—1128 片烟黑曲霉菌株产纤维素酶的条件优化及酶的分离纯化 范坚强 ，周 彬 ，宋纪真 ，王金华 ’，陈义强 ，王永泽 (福建中烟工业有限责任公司技术中心，福建厦门361022；湖北工业大学生物工程学院，湖北武汉430068；郑州烟草研究院，河南 郑州 450001) 摘 要：为降低烟叶燃吸的刺激味、改善 口感、增加香气、提高烟叶品质，从烟叶表面筛选到一株产纤维素酶 活性较高的黑曲霉，应用 Plackett-Burman试验确定4种显著因子 ，R．SM法对4种显著因子进行了优化和分 析，并对酶蛋白的分离纯化作了初步研究。结果显示：发酵产酶的最适碳源为玉米芯 ，氮源为NHNO，，当玉 米芯用量为 1．4％，NHNO为0．4％，温度为30．4~C，pH为5．6时产酶比活力最高，可达40．O2Um·L一。纤 维素酶酶蛋白的硫酸铵盐析最佳饱和度为60％，经 SephadexG100凝胶柱层析纯化后的比活力提高了3．5 倍 ，回收率为32．6％，达到较高水平。 关键词：黑曲霉 ；纤维素酶；响应曲面法 ；凝胶电泳 中图分类号：Q814．1 文献标志码 ：A 文章编号：1004—1524(2012)06—1122-07 OptimizationofcellulaseproductionbyAspergillusnigerseparatedfrom tobaccoandits - rationandpurification FANJian—qiang，ZHOUBin，SONGJi—zhen，WANGJin．hua，CHEN Yi．qiang，WANGYong．ze (TechnologyCenter，FujianBranchofChinaTobaccoIndustryCo．，Ltd．，Xiamen361022，China；SchoolofBio— technology，HubeiUniversityof Technology，Wuhan430068，China；ZhengzhouTobaccoResearchInstituteof CNTC，Zhengzhou450001，China) Abstract：Inordertoimprovetobaccotaste，decreasethesmokingpungenttaste，increasethefragranceandimprove thesmokingquality，amoldspainAspergillusnigerpossessingrelativelyhighercellulaseenzymaticactivityWas isola- tedfrom tobaccoleaves．ThePlackett-Burmandesignwasusedtochoosethemostimportantfactors，then，thesefac— totswereoptimizedbyRSM method，nadthepurificationofenzymeWas investigated．Theresultsindicatedthatthe optimum carbonsourcenadnitrogensourcewere1．4％ corncoband0．4％ NH4NO3，theoptimum originalpHwas 5．6andtheoptimum cultural temperaturewas30．4℃ ．Underthesecondition,s．thespecificenzymeactivitywas 40．02U ·mL～．Thecrudecellulasewasisolatednadpurifiedbymeansofammonium sulfateprecipitation．~llowed bychromatographyonSephadexGIO0．Thespecificactivityofth