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02 2013/09 验研究 利用环介导等温扩增技术对棘阿米巴性角膜炎 行快速敏感的诊断 赵 格 袁 青 宋子成 孙士营 摘要】 （ 。 目的 建立一种环介导等温扩增技术 loop-mediated isothermal amplification ，LAMP ）对棘阿米巴进行检测 方 法 利用提取的棘阿米巴，绿脓杆菌，白念珠菌，单纯疱疹病毒1 型和人角膜上皮细胞的DNA 对LAMP 方法进行 ，角膜涂片检查以及 。同 特异性检测。通过与培养法 real-time PCR 法进行比较对LAMP 方法的有效性进行评价 时 。 ，最低检出量为 我们利用LAMP 检测了3 例临床角膜炎样本 结果 LAMP 对棘阿米巴的检测有很高的敏感性 10 个拷贝数的DNA。所设计的LAMP 引物只能特异的扩增棘阿米巴DNA。在构建的小鼠棘阿米巴性角膜炎模型中， 几乎每个感染后时间点利用LAMP 方法检测阳性率都要高于培养或角膜涂片检查，LAMP 总的阳性检出率显著高 （ 但是和 于这两种方法 0.05 ）， real-time 方法相当。不过几种方法的阳性检出率在不同时间点的变化趋势是相似 的。3 例临床角膜炎样本，2 例疑似棘阿米巴性角膜炎的样本利用LAMP 方法检测阳性，与培养和涂片检查结果一 致；另一例疑似真菌性角膜炎的样本检测结果呈阴性。结论 LAMP 检测法是一种简单快速，具有高特异性和敏感 性的诊断棘阿米巴性角膜炎的方法。 关键词】 棘阿米巴；角膜炎；环介导等温扩增；敏感性；特异性 ： （ 基金项 国家自然科学基金）和山东省医科院基金（2010-22 ） 作者单位：266071 青岛，山东省眼科研究所 山东省眼科学重点实验室- 省部共建国家重点实验室培育基地 ： ， 通讯作者 孙士营 Email ：sunskying@163.com 角膜与外眼病 48 cornea and external disease 实验研究 02 20 13/09 Rapid and sensitive diagnosis of acanthamoeba keratitis by loop-mediated isothermal amplification ZHAO Ge, YUAN Qing, SONG Zicheng, SUN Shiying State Key Lab Cultivation Base, Shandong Provincial Key Lab of Ophthalmology , Shandong Eye Institute,Qingdao 266071, China Abstract 】 Objective A loop-mediated isothermal amplification （LAMP）assay was developed for the detection of Acanthamoeba. Methods The sensitivity of the LAMP assa