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中国癌症杂志 2013年第23卷第10期
《 》
784 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.10
RNA干扰细胞周期蛋白依赖激酶6基因
对尤文肉瘤细胞生物学行为的影响
1 2 1 1 1 1 1 1
张中卒 黄路 虞志明 陈翔 韩智敏 杨东 詹平 曹凯
1. 南昌大学第一附属医院骨科，江西 南昌 330006 ；
2. 江西省妇幼保健院儿童保健科，江西 南昌 330006
［摘要］ 背景与目的：细胞周期蛋白依赖激酶6(cyclin-dependent kinase 6，CDK6)是一类丝/苏氨
酸蛋白激酶，有实验报道其在尤文肉瘤细胞中呈高表达，但在尤文肉瘤细胞中的生物学功能及相关机理仍
不十分清楚。本研究旨在通过研究小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)沉默CDK6基因表达，探讨其
对尤文肉瘤A673、SK-ES-1细胞生物学行为的影响。方法：将化学合成的CDK6-siRNA转染至A673及SK-ES-1
细胞中，实时荧光定量PCR法检测转染前后细胞中CDK6 mRNA的表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测转
染前后细胞CDK6以及CDK6下游因子视网膜母细胞瘤基因(Rb)、磷酸化Rb(P-Rb)的蛋白表达；分别采用CCK-8
法、流式细胞仪、Transwell肿瘤细胞迁移和侵袭实验检测细胞增殖、周期、凋亡、迁移以及侵袭能力的变
P
化。结果：实时荧光定量PCR结果显示，CDK6-siRNA能够明显降低细胞CDK6的表达( 0.01)。抑制CDK6表达
后细胞的增殖速度明显减缓，细胞周期分布发生改变，G /G 期细胞的比例上升，而S期细胞的比例下降，细
0 1
P
胞的早期凋亡率明显升高( 0.01)。各组细胞的迁移能力：untreated组、si-con组及si-CDK6组A673细胞的
穿膜细胞数分别为(516.00±58.59)个、(534.00±124.77)个、(192.33±68.92)个，SK-ES-1细胞的穿膜数
P
分别为(371.33±29.67)个、(363.33±60.28)个、(200.00±20.00)个，差异有统计学意义( 0.01)；各组
细胞的侵袭能力：untreated组、si-con组及si-CDK6组A673细胞的穿膜细胞数分别为(251.00±42.93)个、
(238.67±78.62)个、(94.67±23.03)个，SK-ES-1细胞的穿膜数分别为(310.00±35.36)个、(302.33±41.31)
P
个、(105.00±54.08)个，差异有统计学意义( 0.01)。Western blot检测结果显示，CDK6-siRNA能够明显降
P
低细胞CDK6以及下游因子P-Rb的表达( 0.01)，但细胞总Rb表达量无明显变化。结论：针对CDK6基因的特异性
小RNA干扰片段能够下调
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