大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法.pdf

第29卷 第 6期 暨南大学学报(医学版) VOl_29 NO．6 2008年 12月 JournalofJinanUniversity(MedicineEdition) Dec． 2008 大鼠海马神经元 neurobasal无血清的原代培养方法 王圆圆 ， 张文斌 ， 龚晓兵 ， 郭国庆 ， 陈 静 ， 辛 莉 ， 沈伟哉 ， 原 林 (1．暨南大学医学院解剖学教研室，广东 广州510632；2．暨南大学第一附属医院，广东 广州510630； 3．南方医科大学解剖学教研室，广东 广州510515) [摘 要] 目的：建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法：新生 sD大鼠海马，用neuro— basal培养基培养，免疫荧光鉴定神经元纯度，M丌 法检测其活力。结果：神经元接种 l2～24h后贴壁，并长出细小 突起，3d具有典型神经元形态特征，4d突起形成稀疏的神经纤维网络，8d后神经元5～10个聚集成团，突起密 集，生长稳定，12d后出现细胞碎片。Tubufin荧光染色显示清晰的神经元，突起绵长且相互交织，占细胞总数的 66．7％；GFAP荧光染色的细胞数量少，突起短粗，占33．7％。培养 1～5dMqq代谢率逐渐上升，6～11d处于平台 期 ，11d后下降。结论：neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60％，6～l1d的细胞适于细胞学实验。 [关键词] 神经元； 原代培养； neurobasal培养基； 海马； 大鼠 [中图分类号] 11329．2；Q954．6 [文献标识码] A [文章编号] 1000—9965(2008)06—0547—05 Establishingaserum-freeprimaryculturemethodfor hippocampalneuronsofrats WANG Yuan—yuan ， ZHANG Wen—bin ， GONG Xiao—bing ， GUO Guo．qing ， CHENJing ， XINLi， SHEN Wei—zai， YUANLin (1．DepartmentofAnatomy，MedicalCollege，JinanUniversity，Guangzhou510632，China； 2．TheFirstAffiliatedHospital，JinanUniversity，Guangzhou510630，China； 3．DepartmentofAnatomy，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China) [Abstract] Aim：Toestablishasel-Hm—freeprimaryculturemethodforhippocampalneuronsofrats． M ethods：HippocampalneuronsofneonatalSDratswereculturedbyneurobasalmedium ，thenhtepurity andactivityofneuronswereinvestigatedbyimmunofluorescenceandMTYassays．Results：Neuronswere adhesionanddevelopedsmallneuritesaftercultivatedfor12～24hours，htenatypicalneuronalmorphol— ogyappearedafter2～4 days，upto8 day，manyneuritesextended toofrm sparsenetwork ，mean· while，cellsgahteredtogetherandneuriteswereintensive，atl