PTTG及bFGF在乳腺癌中的表达及意义.pdfVIP

· 252 · 贵阳中医学院学报 第34卷 胞所 占百分比乘积3分为 (+)，6～9分为 (++)，12分 转得 eDNA。引物用 Primer—BLAST设计，熔解温度为 58 为 (+++)；9—12分为高表达，6分 以下为低表达。凡 ～ 6O℃。PCR仪器为ABI2720，B—aetin为内参 ，水对照为 (+)及其以上者均为阳性表达。 阴性对照。PCR反应体系体积为207l，取逆转录产物 ll 1．2．2 RNA抽提 用胰酶消化收集细胞。取5x10。细 作为模板，使用TaqDNApolymerase扩增，94％预变性5分 胞，用 PBS洗一次，加人 1mlTriZol，静置后加入 2007l氯 钟，扩增条件 94℃20秒，55％30秒，72℃45秒，35个循环 仿，混匀，离心。取上清加入 500~1预冷 的异丙醇沉淀 (B—actin为25个循环)，最后一个循环72℃延长 10分钟。 RNA，再用预冷的75％乙醇洗两次，自然干燥后加入 5O 琼脂糖电泳检测 PCR产物。引物由Invitrogen公司合成 ， DEPC水，用 NanoDropl000定量。 序列如下，见 (表 1)。 1．2．3 RT—PCR 等量的PuNA用 SupemeriptM—MLV逆 表 1 引物序列 1．2．4 荧光实时定量qRT—PCR 仪器为 LightCyeler480， 2 结果 试剂为 SYBRGreenqPCRmix。以B—actin为 内参，水对照 2．1 PTIG与bFGF在正常乳腺及乳腺癌中的表达 为阴性对照。cDNA按 1：5～1：10稀释后 I?l作为模板扩 72例乳腺癌标本中P1TrG阳性表达57例，阳性表达率 增，95~C预变性3O秒，扩增条件95℃ 10秒，60~C20秒，40 79．17％；20例癌旁正常组织中阳性表达 1例，阳性率为 个循环，按0．11oC／秒从65℃升温到95oC做熔解曲线。 5．00％，两者比较 ，差异有统计学意义 (P0．01)；乳腺癌 1．3 统计学处理 中bFGF阳性表达41例，阳性表达率56．94％，癌旁正常组 免疫组化指标使用SPSS10．0统计软件进行处理 ，采用 织中阳性表达 2例，阳性率为 10．00％，两者比较，差异有 卡方检 验；相关性采用秩 相关 Spearman进行 等级相关 统计学意义 (P0．01)。具体数据见表2。 分析 。 表 2 P1-】1G与bFGF在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的表达情况 2．2 m G与bFGF的表达与生存时间及复发转移的关系 2．3 乳腺癌中PTTG与bFGF的表达 乳腺癌患者中，PITG与患者5年生存率 (P=0．024)和远 乳腺癌组织中的PTIG与bFGF表达情况见表2，经采 期复发转移 (P=0．023)有相关性；bFGF在患者5年生存 用秩相关 Spearman进行等级相关分析，R=0．4593，P= 率 (P=0．021)和远期复发转移 (P=0．038)有相关性。具 0．0100，说明乳腺癌组织中PTTG与bFGF表达相关。 体数据见表 1。 第6期 卜迟文，杨全德，郭凌川．PI~G及bFGF在乳腺癌 中的表达及意义 ·253 · 一‘盖 暑 # 墨￡ 垂星 13 l 1 15 9 2 8 20 8 3 1I