靶向HBV C基因的siRNA在HepG2.2.15细胞中对HBV的抑制作用.pdfVIP

西南国防医药2012年 12月第22卷第 12期 ．1277． · 论著 · 靶向HBVC基因的siRNA在 HepG2．2．15细胞 中对 HBV的抑制作用 肖 安 ，刘 斌 ，焦 晔，赵 欣，刘明秋 ，严维耀 ，郑兆鑫 [摘要] 目的 研究靶 向HBVC基 因的短发夹状 RNA(shRNA)表达质粒对 HepG2．2．15细胞中HBV的抑制作用。 方法 设计构建两个靶向HBVC基因的shRNA表达质粒 s1和 s2，以及用于对照的非同源 shRNA表达质粒 s3。转染 HepG 2．2．15细胞后 ，通过 RT—PCR和ELISA方法分别检测细胞 中HBVC基因表达和细胞上清中HBVDNA、HBsAg和HBeAg表 达。结果 在转染后24h时，HBVC基因mRNA表达量下降58％～83％，HBVDNA下降了2．44～3．36个log值，HBsAg和 HBeAg的表达水平分别降低了51％一79％和50％～77％。S1、s2联合运用可以提高对HBV的抑制作用 ，而 S3无抑制效果。 结论 靶向HBVC基因的shRNA表达质粒 s1、s2及其联合运用，均能有效地抑制HepG2．2．15细胞中HBV的复制和表达。 [关键词] 乙型肝炎病毒；RNA干扰 ；小干扰RNA；短发夹状 RNA 中图分类号 R512．6 文献标识码 A 文章编号 1004．0188(2012)12．1277．04 doi：10．3969／j．issn．1004—0188．2012．12．001 IntfibitoryeffectoftargetingC genesiRNA onhepatitisB virusin 2． 15cells XiaoAn，UuBjn，Jiaoye2，Zhaoxid，“uMingqiu2，YanWeiyao2，ZhengZhaoxin2 1．DepartmentofInfectiousDiseases，Kunming GeneralHospitalofChengduMilitaryCommand，Kunming，Yunnan，6513032，China；2．StateKeyLaboratoryof GeneticEngineering，Schoolof LifeScience，FudanUniversity，shan曲ai，2130433，China [Abstract] Objective TostudytheinhibitoryeffectofshRNAexpressionplasmidofHBVCgeneonHBVinHepG2．2．15cells． Methods TwoshRNAexpressionplasmids(S1ands2)oftargetingHBVCgeneandonenonhomologousshRNAexpressionplasmid(s3)used forthecontrolweredesignednadconstructed．AfterhtetransfectionofH印G2．2．15cell，hteHBVCgeneexpressionandexpressionsofHBV， DNA，HB~Ag，nadHn~iginhtesupermtnatwe re respcetivelydetcetedbyRealTimePCRnadELISAmethods．Results Afterhtetransfcetion f0r24h，themRNAepxressionofHBVCgenesignificantlydecreasedby58％-83％；theexpressionofHBVDNAdcereasedby2．44—3．36log values；theexpressionlevelsoftmsAgandnBeAgdcereasdeby51％-79％and50％一77％，respectively．CombinedapplicationofS1nads2 coulde~umcehteinhibitoryeffecton I-IBV．whiles3had 110sucheffcet．Conclusion rlheshRNA expressionplasmidsS1andS2andthe combinedapplicationofbothtwoCna effectivelyinhibitthereplicationnadexpressionofHBVinHepG2．2．15cells． [Key