促分裂原活化蛋白激酶(mapk)的研究方法.pdfVIP

20 11年第3期 内蒙古石油化工 5 促 分 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶 ( MAPK) 的 研 究 方 法 白雪梅，张 岩，陶柏秋 ( 内蒙吉亿工职业掌院) 摘要 ：促分裂原活化蛋 白激酶( mi t ogen- - act i vat ed pr ot e i n ki na s e ，MAPK) 是一类存在于各种 真核生物体 中的丝氨酸 ／苏氨酸型蛋 白激酶 。它与其它一些信号分子组成MAPK级联信号通路，接受外 界刺激信号，将信号传入细胞内，影响特定基 因的表达，从而在真核生物的生长 、发育、分化和凋亡等多 方面起着重要敏诈冠。为进一步研 究其机理 ，本文就其研究方法作一阐述。 关键词：MAPK；研究方法 中图分类号：Q550 ．3 文献标识码：A 文章编号：1006- - 79 1( 2011) 03一o005一03 蛋白激酶是一类可 以使特定的蛋白质侧链中的 产生抗体 ，还能与抗体产生特异性结合 口】。在确定 丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基共价磷酸化的酶，蛋 自 MAPK级联途径中有关激酶 的种类时，特别是在与 质磷酸化可 以控制酶的活性及其与其他分子的相互 其余相似 的激酶进行区分时 ，免疫沉淀法以其微量、 作用。促分裂原活化蛋白质激酶( mi t oge n- - ae- - t i — 灵敏和特异性强的检测特 点得到 了广泛 的应用 。 r at ed pr ot ei n ki na se ，MAPK) 是丝 ／苏氨酸蛋白质 MAPK特异性抗体是通过识别双磷酸化的三 激酶的一个大家族，包含 11个保守的亚结构域 ，现 肽模体PTEPY发生免疫结合的。使用某种MAPK 已于真核生物( 酵母、哺乳动物、入及植物) 中广泛发 的一段特异性序列制备的单一特异性抗血清( mono 现 【¨。真核生物中的MAPK在将外源刺激信号转入 —spe ci f i c ant i s er um) 可 以直接鉴定这种特定的 胞 内应答受体 ／感应器的下游 的过程 中起着枢纽的 MAPK[ ¨。Zhang和Kl e ss i g( 199 ) [7] 证明了WI PK 作用 。 和SI PK对各 自的抗体Ab—p ．44N 和 Ab- - p 4 N 有 随着生物化学、遗传学和分析化学方法 的不断 高度的免疫特异性。 发展，近年来在各种蛋白激酶的研究过程 中，研究者 3基因突变 们逐渐发展出一些 比较成熟的方法。 基 因敲除和基因突变是 目前研究植物功能基因 1测定MAPK活性 的底物一MBP 组学的重要途径和手段。近年来，在MAPK的基因 到 目前为止，很多测定真核生物中的MAPK活 功能研究 中，应用较多的是 点突变和基因敲除等。突 性的方法都 以MBP作为底物 ，MBP是一族携带正 变体 的构建是基因功能研究中的一个难点和热点。 电荷、能促进髓鞘形成和折叠的蛋 白质[ 2 】，Mi yamo． Yang等uj ( 2001) 在烟草中把一种MAPKK— t O和Ka ki uc hi ( 1975) [ 3] 首次在鼠脑中发现MBP，而 Nt MEK2上保守的S ／TXXXXXS ／T模体中的S ／T 且它是磷蛋 白磷酸酶( phosphopr ot ei n phos - 分别用谷氨酸( E) 或天冬氨酸( D) 代替时，突变体表 ph at as es) 的底物。研究表明，MBP是多种蛋白激酶 现出组成性的活性，比野生型的Nt MEK2 的活性有 如蛋白激酶C、蛋白激酶A、钙 ／钙调蛋白依赖的蛋白 很大提高。在酵母和动物中也有类似的结果。而将 激