肺炎链球菌去信号肽脂蛋白PsaA锌离子结合特性的初步表征.pdfVIP

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2011，31(12)：27-32 肺炎链球茵去信号肽脂蛋 白PsaA锌离子 结合特性的初步表征冰 李 楠 王南杰 王红翠 李 慧 詹 胜 阳小燕 孙雪松 (1暨南大学生命与健康工程研究院 广州 510632) 摘要 肺炎链球菌是细菌性肺炎的主要病原体。PsaA是各种肺炎链球菌共有的遗传保守的特异 性表面金属结合脂蛋 白。通过PCR扩增肺炎链球菌D39不含信号肽的P 基因片段，将其通过 T4连接酶连接至含6His标签的表达载体PBAD／HisA中，转化表达宿主大肠杆菌Top一10后用L (+)一阿拉伯糖诱导重组蛋 白的表达。重组蛋 白经亲和镍柱纯化以后，用外切酶．重组肠激酶 (REK)去除6His标签。感应偶合 电浆质谱 (ICP—MS)测得纯化的PsaA蛋 白以 1：1比例结合金属 锌离子。进而，通过圆二色谱法分析金属离子的结合对蛋 白二级结构中仅．螺旋和 3-片层含量的 影响，荧光光谱研究蛋 白结合锌离子的解离常数及结合当量，为进一步研究该蛋 白在体外的金属 结合特性及细菌的金