锯缘青蟹呼肠孤病毒感染的组织病理和超微病理观察.pdfVIP

第3O卷 第 5期 华 中 农 业 大 学 学 报 VoI．30 No．5 2011年 1O月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Oct．2011，640~ 645 锯缘青蟹呼肠孤病毒感染的 组织病理和超微病理观察 熊 娟 陈吉刚 杨季芳 陈孝煊 1．华中农业大学水产学院，武汉430070~2．浙江万里学院生物与环境学院，宁波315100 摘要 运用石蜡切片及超薄切片技术，对感染呼肠孤病毒的锯缘青蟹组织进行组织病理和超微观察。石蜡 切片结果显示：SsRV的侵染导致青蟹的肝胰腺、鳃、肠、心、胃和肌肉组织中产生明显组织病理变化，其中以肝胰 腺、鳃组织和肠组织的病理变化最为明显，主要包括肝胰腺基底膜破损、肝细胞坏死，鳃腔堵塞，肠上皮细胞脱 落，心肌与足肌纤维排列紊乱、断裂等病理变化 。超薄切片结果显示：SsRV在肝胰腺、鳃、肠、心等组织广泛分 布，说明SsRV组织嗜性广泛 ；SsRV可导致靶器官细胞核染色质凝结、电子密度增高、髓样小体和溶酶体产生、 线粒体组织结构破坏和粗面内质网扩张变形等明显细胞病理学变化。 关键词 锯缘青蟹；呼肠孤病毒；组织病理；超微病理 中图分类号 S945 文献标识码 A 文章编号 1000—2421(2011)05—0640—06 水生呼肠孤病毒为感染水生生物的一类呼肠孤 1_2 光镜样品制备及观察 病毒，它是近年来水产学研究较为活跃的一个领域。 活体解剖锯缘青蟹，分别取患病青蟹和健康青 在全球范围内的鱼类、贝类、甲壳类等水生生物中已 蟹肝胰腺、鳃、后肠、心肌、足肌和胃组织，预冷戊二 分离出4O余株水生呼肠孤病毒l1]。有些水生呼肠 醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，苏木精一伊红 (H． 孤病毒可引起宿主严重的疾病，如草鱼呼肠孤病毒 E)染色，中性树脂封片，在 OlympusBX51显微镜 (grasscarpreovirus，GCRV)E。Mari等[。4首次 下观察 。 从地中海螃蟹中分离出呼肠孤病毒 P和W2，其后 1．3 电镜样品制备及观察 国内外学者又从河蟹和青蟹中分离出多株呼肠孤病 超薄切片制作按陈吉刚等[g]报道的方法进行， 毒[5{]。2004年以来，一种暂命名为 “清水病”的青 即将组织于活体状态迅速取下，分割成小于 1mm 蟹疾病在浙江省三门湾及临近地区暴发与流行。疾 的小块，经戊二醛一锇酸双固定，乙醇脱水，环氧树脂 病流行期间，陈吉刚等L9]通过电镜观察，在患病青蟹 Epon812包埋，LKB超薄切片机超薄切片，醋酸双 的心肌、鳃、胃和肠道组织细胞 中发现了大量的呼肠 氧铀一柠檬酸铅双染法染色，JEM1011透射 电镜 孤样病毒粒子 (Scyllaserratareovirus，SsRV)，并 观察 。 利用单引物扩增技术获得该病毒部分核酸序列_1。。。 2 结果与分析 笔者对该患病的锯缘青蟹的组织病理及超微病理进 行深人观察，现报道如下。 2．1 石蜡切片观察 1)肝胰腺。由图1一A可以看出，健康青蟹肝胰 1 材料与方法 腺组织由众多分支的肝小管构成，每一个肝小管都 1．1 材 料 是由位于基膜上的单层柱状上皮细胞构成，中间有 患病锯缘青蟹于2009年 11月采 自浙江省三门 明显的十字形管腔，内有流动的血液淋巴。患病青 县某养殖场；健康蟹采 自同一地区某健康青蟹养殖 蟹的基底膜破损，大量血细胞浸润，肝小管管腔收 场，并经逆转录环介导等温扩增技术检测确认不携 缩，腔内血淋巴减少，部分肝细胞发生坏死，出现深 带 SsRV病毒后作为阴性对照。 染的明显病灶区域(图l-B)。 收稿 日期：2010—12—31 基金项 目：国家 自然科学基金项