四株胡萝卜软腐欧文氏杆菌胡萝卜亚种新菌株的分离鉴定.pdfVIP

244— 251 草 业 学 报 第 2O卷 第 4期 2011年 8月 ACTA PRATACULTURAESINICA Vol_2O，No．4 四株胡萝 卜软腐欧文氏杆菌胡萝 卜 亚种新菌株的分离鉴定 赵玲 ，柴兆祥 ，李金花 ¨，王蒂 (1．甘肃农业大学草业学院，甘肃 兰州 730070；2．甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室 ，甘肃 兰州 730070；3．草业生态系统 教育部重点实验室 ，甘肃 兰州 730070；4：中一美草地畜牧业可持续发展研究中心，甘肃 兰州 730070) 摘要 ：采用棋盘式取样法 ，从正茬、重茬、连作 2年和连作 3年 的马铃薯播前、现蕾期、成熟期和收获期4个不 同阶段 采集马铃薯根围土样 。以稀释平板法 ，用选择性培养基 CVP分离软腐欧文 氏杆菌，共得到 42个菌株 。在形态学 观察和生理生化特性测定的过程 中发现编号为 GAUP—b41o、GAUP—b492、GAUP-b416和 GAUP-d34等 4个菌株 的主要性状一致 ，且与其他菌株的性状不同。致病性测定结果显示 ，这 4个菌株均能引起马铃薯薯片腐烂 。对其 中的2个菌株进行 了16SrDNA序列分析 ，其 PCR产物 的序列与 GenBank上登记 的 18个分离 自中国大 白菜上 的 Erwiniacarotovorasubsp．carotovora菌株 的亲缘关系最近，同源性均达 99 。利用 DNAStar软件绘制系统发育 树状 图，菌株 GAUP—b41o亦与这 18个 E．carotovorasubsp．carotovora菌株位于系统发育树 的同一分支 ，聚为一 类 ；菌株 GAUP-b492与其 中的 16个 E．carotovorasubsp．carotovora菌株位于系统发育树 的同一分支 ，聚为一类 ； 结合生理生化特性和 16SrDNA序列分析 ，确定这 4个菌株为胡萝 软腐欧文氏杆菌胡萝 h亚种 (E．carotovora subsp．carotovora)新菌株 。 关键词 ：马铃薯 ；连作 ；根 围土壤 ；胡萝 软腐欧文 氏菌胡萝 卜亚种 ；16SrDNA 中图分类号：$432．1 文献标识码 ：A 文章编号：1004—5759(2011)04—0244—08 细菌 、真菌和放线菌是土壤微生物的三大类群_1]，在植物根系的微生态环境 中对物质和能量的转化起重要 作用 ]。欧文氏杆菌(Erwinia)是很多植物的病原菌 ，植物致病欧文 氏杆菌常引起植物器官和组织的软腐 ]， 主要有胡萝 卜软腐欧文氏杆菌胡萝 卜亚种 (E．carotovorasubsp．carotovora，Ecc—Pectobacteriumcarotovora subsp．carotovora)、胡萝 卜软腐欧文 氏杆菌黑胫亚种 (E．carotovorasubsp．atroseptica，Eca—P．carotovora subsp．atroseptica)和菊欧文 氏杆菌 (E chrysanthemi，Ech=P．carotovorasubsp．chrysanthemi)]。胡萝 卜 软腐欧文氏杆菌(E．carotovora)、危害胡萝 卜(Daucuscarotavar．sativa)、烟草 (Nicotianatabacum)、黄瓜 (Cu— cumissativus)、茄子 (Solanummelongena)、番茄 (Lycopersiconesculentum)、辣椒 (Capsicumfrutescens)、大 白 菜 (Brassicapekinensis)、甘蓝 (B．oleraceavar．capitata)、马铃薯 (Solanumtuberosum)等 ，同时引起贮藏期蔬 菜腐烂_l8]。Ecc是机遇性植物病原菌 ，能够以腐生的形式存活于土壤 中，环境条件适合时，能产生许多酶 ，通过浸 腐 的方式引起植物器官和组织的严重损伤[g。 。 rRNA分子在生物体中普遍存在 ，其一级