亲和层析法分离纯化纳豆激酶.pdfVIP

58 2011，Vo1．32，No．16 晶 科 学 ※工艺技术 亲和层析法分离纯化纳豆激酶 刘 柳1，李南薇2，郭 勇3 (1．暨南大学食品科学与工程系，广东 广州 510632；2．仲恺农业工程学院轻工食品学院，广东 广州 510225； 3．华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510641) 摘 要：目的：以纳豆激酶的作用底物纤维蛋白为配基制备亲和层析胶，分离纯化纳豆激酶。方法：纳豆杆菌 发酵液经硫酸铵分段盐析、透析得粗酶，在4~C条件亲和层析法分离纯化，利用十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶 电泳(sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis，SDS—PAGE)对酶纯度进行检验。结果：经亲和层析 得纳豆激酶为电泳纯，纯化倍数为8．3，回收率43．9％。纯酶的最适pH值和温度分别为pH7．O～9．0、50*C；温度 高于60℃纤溶酶活性迅速下降；在pH6．O～10．0范围内稳定性好；Mg2对其有微弱激活作用，Cu2+有显著抑制作 用。结论：以琼脂糖包埋纤维蛋白制备的层析胶可用于纳豆激酶的快速分离纯化 。 关键词：纳豆激酶；分离纯化；亲和层析；纤维蛋 白；酶学性质 AffinityChromatographicPurificationofNattokinase LIU Liu，LINan-wei，GUOYong (1．DepartmentofFoodScienceandEngineering，JinnaUniversity，Gunagzhou 510632，China； 2．ColegeofLightIndustryandFoodTcehnology，Zhongl~ UniversityofAgriculturalnadEngnieering，Guangzhou 510225，China； 3．SchoolofBioscieneenadBioengineering，SouthChinaUniversityofTcehnology，Guangzhou 510641，China) Abstract：Objective：Toseparatenadpurifynattokinasebyfibrinaffinitychromatography．Mehtods：Thefermentation supematantofBacillussubtilissubsp．nattowasfractionallysaltedoutwithammonium sulfateanddialyzed，nadhtecrude nattokinaseobtainedWaSpurifiedbyaffinitychromatographiccolumnchromatographyat4℃．Thepuriytofpurifide nattokinase wasnaalyzedbySDS—PAGE．Results：Nattokinaseofelectrophoreticalpuritywasobtained，wiht apurifyfoldof8．3anda recoveryof43．9％．TheoptimumreactionpHnadtemp~amrepfpurifiednattokinasewere7．0— 9．0nad50℃．respectively． Th eenzymeactivityexhibitedasharpdropattemperaturesabove60℃nadgoodsmb~ytnihtepHrangeof6．0— 10．0．The enzymeWas slighflyactivatedbyMg butdramaticallyinhibitedbyCu ．Conclusion：Affmiyt chromatographyonfibrin- agraoseisapplicabletofastpurifynattokinase． Keyw