过表达apoA-Ⅰ对BEL-7402细胞内脂质堆积的影响.pdfVIP

2012链 4月 首 都 医 科 大 学 学 报 Apr．2012 第33卷 第 2期 JournalofCapitalMedicalUniversity Vol_33 No．2 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2012．02．013] · 基 础 研 究 · 过表达 apoA—I对BEL-7402细胞内脂质堆积的影响 覃 岭 王宇童 (首都医科大学基础医学院细胞生物学系，肝脏保护与再生调节北京市重点实验室，北京 100069) 摘【要】 目的 通过建立过表达载脂蛋白A-I(apolipoproteinA—I，apoA—I)的细胞模型，用不同浓度及不同类型的脂肪酸作 用于细胞，检测过表达apoA-I与正常细胞 内脂质水平，来研究利用过表达 apoA—I促进 ATP结合盒转运子A1(ATP—binding cassettetransporterA1，ABCA1)介导的脂质转运途径，降低脂质合成，进而影响非酒精性脂肪性肝炎 (non—alcoholicsteatohepatitis， NASH)细胞的脂质堆积的分子机制，探索一种新方法，通过 apoA—I／ABCA1这一途径改变细胞内脂质代谢来预防NASH。方法 ① 通过不同浓度和类型的脂肪酸处理人肝癌细胞系BEL-7402细胞 ，作用6、12、24h后 ，经油红O染色，检测不同时间脂质在细 胞内的定位，从而确定出适合的脂肪酸浓度及作用时间；② 通过MTT法检测不同浓度及类型的脂肪酸作用细胞 6、12、24h后， 细胞活性的变化情况；③ 分别转染空载体质粒pcDNA3．0与质粒peDNA3．0／apoA—I，通过Westernblotting的实验方法，检测细 胞内、外apoA．I的表达情况；④ 对正常或过表达apoA-I的BEL-7402细胞模型，以最适的实验条件作用于正常 (对照组)和过表 达apoA—I(实验组)的BEL-7402细胞，检测细胞内胆固醇、游离脂肪酸以及三酰甘油的含量。结果 ① 200~mol／L或400 p~mol／L浓度脂肪酸作用6、12及24h均可使脂质在 BEL-7402细胞胞质中堆积，脂质的产生对脂肪酸呈剂量和时间依赖性；② 饱和脂肪酸棕榈酸使细胞活性降低 ，且对细胞生长的抑制作用随棕榈酸的浓度及作用时间的增加而加强；③ apoA—I过表达于 BEL一7402细胞内，且 apoA—I可以释放到细胞外 ，协助ABCA1转运胆固醇；④ 与正常的BEL-7402细胞相比，过表达apoA—I组细 胞内的三酰甘油、游离脂肪酸以及胆固醇均有显著减少。结论 与正常组相 比，过表达apoA—I可以减少胆固醇、游离脂肪酸及 三酰甘油在人肝细胞内的聚积，从而对于NASH的防治具有治疗作用。 【关键词】 ATP结合盒转运子A1；非酒精性脂肪性肝炎；载脂蛋白A—I 【中图分类号】 Q28 Effectsof0Verexpressi0n0fap0Iip0pr0teinA-I onlipid accmulation in BEL．7402cells QINLing，WANGYu—tong (DepartmentofCellBiology，MunicipalLaboratoryforLiverProtectionandRegulationofRegeneration， SchoolofBasicMedicalScience，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China) A【bstract】 Objective Toexploreanewtherapytochangethelipidmetabolismandpreventnon—alcoholicsteatohepatitis(NASH)，to establishacellmodelthatoverexpressesapolipoproteinA—I(apoA—I)，whichpromotescellularcholesteroleffluxbyinteractingwith ATP—bindingcassettetransporterA1(ABCA1)．Theeffectanditsmolecularmechan