宫颈癌盆腔淋巴结HPV DNA检测的临床意义.pdfVIP

山东医药2008年第48卷第45期 宫颈癌盆腔淋 巴结 HPVDNA检测的 临床意义 马 玎 ，戴淑真 (青岛大学医学院附属医院，山东青岛266003) [摘要] 以宫颈癌盆腔淋巴结中高危型人乳头状瘤病毒 16／18(HPV16／18)特异性引物通过 PCR方法，检测 27例宫颈癌477枚盆腔淋巴结中HPV16／18DNA。27例宫颈癌原发灶HPV16／18DNA检出21例，21例HPV16／18 阳性原发灶的369枚淋巴结阳性率为 13．82％。淋巴结 HPVDNA阳性率在不同年龄、肿瘤直径、细胞分化程度 、病 理类型、肌层浸润深度 、有无淋巴结转移和不同淋巴结清扫数的宫颈癌差异有显著性意义。认为在无转移淋巴结 检测到HPV基因，对宫颈癌微小转移具有提示意义，有助于发现普通病理学难以检测到的早期隐匿性转移。 [关键词] 宫颈癌；淋巴结 ；乳头状瘤病毒；聚合酶链反应 [中图分类号] R737．33 [文献标识码] B [文章编号] 1002—266X(2008)45-0053-03 宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤 ，盆 进行 PCR扩增，以确定 DNA提取质量是否充足。 腔淋巴结转移与否不仅决定了手术范围，而且也是 原发灶和淋巴结均用HPV16／18两对引物扩增 。20 判断预后和术后辅助治疗的依据。本研究选择高危 l反应体系包括 ：10 l2×PremixTaqⅢHotStart 型人乳头状瘤病毒 16／18(HPV16／18)为检测指标， Version(其 中包含 TaKaRaTaq HS、PCRBuffer、 采用PCR技术检测 27例宫颈癌患者盆腔淋巴结中 dNTPMixture，Mg“)，1 l上游引物 ，1Ixl下游 引 的HPVDNA，分析其临床意义。 物，6 lH2O，2tzlDNA模板 。反应条件 ：94oC5 1 材料与方法 min预变性，94℃30S和 55℃45s，72℃45s共 1．1 材料 选择2007年 1—10月青岛大学医学院 35个循环，72℃ 10min延伸。扩增产物经2％的琼 附属医院行广泛子宫切除术和盆腔淋巴结清扫术患 脂糖凝胶电(120V、30min)，溴化乙锭染色，在紫外 者的石蜡标本 27例，共 477枚淋 巴结。年龄 29～ 凝胶成像仪下观察 PCR扩增产物的片段大小并与 62．7岁、平均42．9岁，宫颈癌临床分期按国际妇产 分子量标准进行对照，鉴定扩增产物的准确性。 科联盟制定的标准，I期 2O例、Ⅱ期 7例。所有患 1．3 统计学方法 淋 巴结 HPVDNA阳性率的比 者术前均未行放疗和化疗。选取7例妇科 良性疾病 较采用 检验，数据不足者采用Fisher精确概率法 子宫肌瘤手术治疗时取得 20枚淋巴结作为阴性对 检验，采用SPSS14．0统计软件进行相关处理。检 照，均经过患者的知情 同意。试剂：TaKaRaDEX— 验水准 =0．05。 PATTM、PremixTaqTMHotStartVersion，DNA Mark— 2 结果 er。HPV16：5一TGTGCTGCCATATCTACTrCAGAAAC 2．1 宫颈癌组织中HPV16／18DNA的表达 27例 TAC一3 ，5 ·TAGACCAAAATTCCAGTCCTCCAAA一3 ， 宫颈癌组织中，原发灶 HPV16／18DNA阳性 21例 186bp；HPV18：5 一AGTCTCCTGTACCTGCGCAATAT (77．78％)，其中HPV16DNA的阳性率为70．37％ GAT一3 ．5一GAACACCAAAGTTCCAATCCTCTAAAAT (19／27)，HPV18DNA的阳性率为 l4．8l％(4／27)。 AC一3，177 bp；内参 照 GAPDH：5一TGTGCTGC— 所有样本 内参照 GAPDH表达均为阳性，这说 明 CATATCTACITrCAGAAAC，rAC一3 ．5一TAGACCAAAA DNA提取的质量是充足的。 ITrCCAGTCCTCCAAA一3 ，146bp。