甘蓝型油菜FAE1基因启动子的克隆和瞬时表达载体的构建及功能分析.pdfVIP

2011年9月 四川师范大学学报(自然科学版) Sept．，2011 第34卷 第5期 JournalofSichuanNormalUniversity(NaturalScience) Vo1．34．No．5 甘蓝型油菜 FAE1基因启动子的克隆和 瞬时表达载体的构建及功能分析 胡 浩 ．一， 王茂华 r， 刘绵学 ，一， 杨 毅 (1．四川大学 生命科学学院，四川 成都 610064； 2．四川大学 生物资源与生物环境教育部重点实验室，四川成都610064) 摘要：油菜脂肪酸延长酶基因FAE1是广泛存在于植物中并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链 延长的酮脂酰CoA合成酶，根据GenBank上已知的植物 FAE1基因启动子序列设计引物，以从甘蓝型油菜 (Braccicanapus．L)叶片中提取的总DNA为模板，进行PCR扩增 ，获得了1328bp的片段．回收该片段，并 连接到pMD18一T载体测序．序列在NCBI进行 blast比对，同源性为99．78％，说明该片段与植物中已知的 FAE1基因的启动子序列有极高的相似性．将该片段替换掉改造后的pBI221上面的35S启动子从而构建 了 原生质体瞬时表达载体．然后通过PEG介导的方式将含有FAE1启动子驱动的荧光素酶报告基因(LUC)表 达载体导入油菜原生质体中，研究报告基因表达量，证明出脱落酸 (ABA)影响了报告基因的表达，随着 ABA浓度的不断增加，LUC的表达量呈现逐步下降的趋势． 关键词：FAE1启动子；瞬时表达；荧光素酶 中图分类号：Q78 文献标志码：A 文章编号：1001—8395(2011)05—0719一O5 doi：10．3969／1．issn．1001—8395．2011．05．025 植物油是重要的农产品之一，现已发现在植物 并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链延长 油中存在的脂肪酸有上千种．近几十年来，人们在 的酮脂酰 CoA合成酶，研究FAE1的启动子的功能 许多油料作物脂肪酸成分改造方面取得了巨大的 及其影响的环境因子，是非常必要的过程 ¨J．高 成果．通过经典的育种技术，如诱变、筛选、杂交等 等植物基因表达 ，是当前分子生物学研究的热点之 方法来获得一些应用价值高、性状优 良的作物品 一 ， 广受关注-3J．ABA在植物的生理活动过程 中 系．近年来，随着分子生物学和基因工程技术的发 扮演着重要的角色 ¨，参与调节植物生长发育和 展，油料作物特别是油菜中许多参与各种脂肪酸合 环境胁迫应答等诸多生理过程．本实验利用 PCR 成的酶基因相继被分离和克隆，加快了对油菜的脂 方法克隆到甘蓝型油菜中FAE1基因的启动子．通 肪酸成分改造 的步伐．芥酸 (erHcicacid，C22：1， 过网站预测分析，FAE1具有基本的ABA信号响应 △13)属于超长链脂肪酸 (verylongchainfattyacid， 元件ABRE(abscisicacid—responsiveelements：PyG— VLCFAs)．天然的油菜通常富含芥酸 (通常为45％ ACACGTGG)．在此基础上构建 FAE1启动子与荧 ～ 60％)．而植物芥酸的合成是在 内质网上脂肪酸 光素酶报告基因(Luciferase：LUC)融合的瞬时表达 延长酶 1(FattyAcidElongase1)的作用下进行的．